Limulus Amebocyte Lysate Test (LAL) är en metod för att detektera och kvantifiera bakteriella endotoxiner som används i stor utsträckning av läkemedels- och bioteknikindustrin. Testets biokemiska princip bygger på koagulationsreaktionen i hemolymphen hos Limulus polyphemus, allmänt känd som atlantisk hästskogskrabba, i närvaro av antigener med mikrobiell yta, t.ex. lipopolysackarider eller bakteriella endotoxiner.

Företaget ”Wako Chemicals” är bland de företag som tillverkar LAL-reagens på internationell nivå tack vare sin unika formel av ett LAL-reagens som är specifikt för bakteriella endotoxiner utan interferens av betaglukaner i proverna, tack vare tillsats av karboximetylerad curdlan (CMC) som är kolofylerad med LAL. Under varumärket PYROSTAR™ tillverkar och marknadsför detta distributionsföretag av forskningsreagens LAL-reagens och tillbehör som uppfyller alla normer, bestämmelser och kvalitetsstandarder som fastställts av FDA från USA.

Vi kommer nu att tala om de olika reagenser och tillbehör med vilka Wako bidrar till studiet av bakteriella endotoxiner:

För det första har vi Limulus PS Simple Test kit, som gör det möjligt att detektera och kvantifiera endotoxiner utan interferens från andra samexisterande substanser med hjälp av ett affinitetsadsorbent för endotoxiner kallat Pyrosep™. Med denna metod kan vi mäta endotoxin i ett lipofilt prov förutsatt att det kan lösas i etanol, t.ex. fettlösliga vitaminer, oljor och fetter, albuminer osv. som normalt inte kan mätas med ett konventionellt Limulus-test. Dessutom går inget LAL-reagens till spillo eftersom det appliceras individuellt i flaskor med det enkla testet och kan användas i exakt den mängd som krävs för mätningen.

PYROSTAR™ ES-F-serien är en unik formulering som innehåller karboximetylerat curdlan (CMC) kolofylifierat med LAL med målet att avlägsna interferensen med β-glukaner. ES-bufferten som utvecklats av Wako innehåller höga CMC-koncentrationer och förvandlas till ett endotoxinspecifikt LAL-reagens. Detta reagens är avsett att användas både för kvalitativ detektion av endotoxiner med hjälp av gelklotmetoden och för kvantitativ detektion av endotoxiner med hjälp av kinetiska turbidimetriska metoder (KTA). Ett fotometriskt instrument, Toxinometer®, utvecklat av Wako Pure Chemical Industries, Ltd., används för att mäta hastigheten på turbiditetsförändringen. Satserna PYROSTAR™ ES-F finns med och utan Standard Control Endotoxin (SCE): ett lyofiliserat reagens som raffinerats från E.coli och som används för att bekräfta LAL-reagensets känslighet, validera produkttestmetoderna och förbereda hämmningskontroller.

För att stödja dessa reagenser utvecklar Wako också en endotoxinextraheringslösning som kan extrahera endotoxiner från ytor där de inte kan extraheras med vatten eller salt. Dess användning rekommenderas i endotoxinprover på utrustning och anordningar som kan komma i kontakt med vätskor som innehåller blod eller proteiner.

Toxinometer® ET-6000 är en datoriserad kinetisk inkubationsläsare som kan innehålla 3 testmetoder: gelklump, KTA och KCA (kinetiskt kromogentest). Denna utrustning gör det möjligt att erhålla resultat från gelklot och KTA från samma prov. Den mäter samtidigt upp till 16 prover med en kontaminationsrisk som är mycket lägre än mikroplattan och gör det möjligt för oss att arkivera standardkurvorna. Toximaster® QC7 är programvaran som tillhandahåller alla funktioner för databehandling och utarbetande av rapporter för LAL-testet med Toxinometer® ET-6000.

För övrigt ser vi bland tillbehören från Wakos LAL-kataloger även provrör med och utan aluminiumlock. Dessa rör är tillverkade fria från endotoxiner, tillverkade av borosilikatglas och utformade för gelklotmetoden. Glasets tjocklek kan kalibreras specifikt till Toxinometern för stabil ljusintensitet och transmittans.

Ett annat LAL-reagens som marknadsförs av Wako är KY Color Limulus-kitet. Detta reagens har utformats för KCA-metoden och kan användas både i kinetisk läsare och i en mikroplattläsare. Det omfattar ett multitestkit och ett enkelt testkit, båda utformade för en kolorimetrisk analys baserad på tid, med hjälp av ett syntetiskt substrat som genererar en gul färg och som specifikt kan detektera endotoxinet med hög känslighet.

Bibliografi:

1) Iwanaga, S. Biokemisk princip för Limulus-testet för att detektera bakteriella endotoxiner. Proceedings of the Japan Academy, Series B, 83(4), 110-119. (2007).

2) Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test of Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products and Medical Devices. U.S. Dept. of Health & Human Services, FDA, December (1987).

3) Katsuhito Inoue, Aya Takaoka, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 110 (1992), 6th Annual Meeting of the Japanese Society for Alternatives to Animal Experiments.

4) Katsuhito Inoue, Tomoaki Harada, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Utdrag 44 (1994), 21st Annual Meeting of the Society for Antibacterial and Antifungal Agents.

5) Tsuchiya, M.; Oishi, H.; Takaoka, A.; Fusamoto, M. y Matsuura, S. Diskriminering mellan endotoxin och (1-3) beta-D-glukan med hjälp av turbidimetrisk kinetisk analys med Limulus amebocytlysat. Chem Pahrm Bull (Tokyo), 38(9). 2523. (1990).

LAL PRODUCT LINE

LAL Reagent Kit	LAL Accessories

.