3.4.4.2 Kiral gaskromatografi

Separation av enantiomerer av amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA och MDEA genom GC med olika stationära faser har beskrivits. Separationen av l-TPC-derivaten beskrevs på DB-1 (tvärbunden metylsilikon) och DB-17 (50 % fenylmetylsilikon) motsvarande GC-kolonner. GC-förhållandena för DB-17-kolonnen var en inledande ugnstemperatur på 120-210°C vid 30°C/min, sedan till 260°C vid 6°C/min och hålls i 1 minut. Med DB-1-kolonnen var förhållandena 130-190°C vid 4°C/min, sedan 250°C vid 25°C/min och 2 minuter. I båda fallen var temperaturen i injektionsporten och gränssnittet 270°C. De joner som övervakades var m/z 237 för amfetamin och MDA, m/z 241 för amfetamin-D5 och MDA-D5, m/z 251 för metamfetamin och MDMA, m/z 255 för metamfetamin-D5 och MDMA-D5, m/z 265 för MDEA och m/z 270 för MDEA-D5. Metoden kan användas för att separera och identifiera enantiomererna av var och en av analyterna vid koncentrationer som sträcker sig från 5 till 10 000 ng/ml över hela intervallet (0-100 %) för varje enantiomer. Alla enantiomertoppar kunde lätt separeras vid baslinjen på DB-1-kolonnen, men på DB-17-kolonnen kunde d-enantiomererna av MDMA och MDEA inte separeras. Detta skulle orsaka problem med många GC-detektorer, men masspektrometern kunde lätt övervaka de unika jonerna för var och en av analyterna och särskilja dem från varandra. Dessutom är det osannolikt att hitta både MDMA och MDEA som missbrukas samtidigt, varför sannolikheten för att ett prov skulle innehålla båda föreningarna skulle vara låg. I beskrivningen av analysen av MDEA-enantiomerer angav Paul et al. ett problem med interferens av gemensamma joner som förhindrade användningen av mer än en enda jon för den analyten trots att man använde ett annat derivatiseringsreagens och olika GC-förhållanden.

Andra forskare har också rapporterat enantiomerseparation med hjälp av chirala prolylderivat .

Fallon et al. rapporterade den enantiomera dispositionen av MDMA och metaboliter efter administrering av MDMA (40 mg) till åtta friska frivilliga personer följt av insamling av urin- och plasmaprover. Efter extraktion derivatiserades drogerna med MTPA och kromatograferades på en DB-17-kolonn vid 50 °C i 2 minuter till 250 °C vid 25 °C/min och sedan till 290 °C vid 2 °C/min med NPD för detektion. Plasmaproverna extraherades, derivatiserades och kromatograferades på en DB-1 motsvarande (HP ultra 1) kolonn vid 100°C i 3 minuter till 285°C vid 15°C/min och hölls i 5 minuter och analyserades med MS. Ioner vid m/z 119, 139, 162, 189, 260 för amfetamin, 135, 162, 189, 260 för MDA, 135, 162, 189, 260 för MDMA användes för att detektera de aktuella föreningarna. Kvantifiering utfördes med hjälp av m/z 162 för drogerna och m/z 148 för den interna standarden metoxifenamin. Testet visade en nära överensstämmelse mellan faktisk och uppmätt enantiomersammansättning vid tre olika koncentrationer och fyra olika förhållanden.

MTPA användes av ett antal andra författare (som tidigare nämnts) för analys av amfetamin och besläktade föreningar. Med hjälp av en DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) och GC-förhållanden: Injektorporttemperatur 140°C. Den initiala ugnstemperaturen ställdes in på 140 °C i 0,5 minuter, sedan på 215 °C vid 15 °C/min och därefter på 285 °C vid 35 °C/min och hölls i 1 minut. Överföringsledningens temperatur hölls på 280 °C. Denna metod användes för separation av enantiomerer av amfetamin och metamfetamin. Metamfetamin-enantiomererna separerades med 0,07 min vid en retentionstid på >7 min, vilket innebär att enantiomererna ligger inom 1 % av varandra, vilket är ett vanligt krav för godtagbar retentionstidsvariation inom en analytisk körning. Eftersom båda enantiomererna eluerar nära varandra är det viktigt att noggrant utvärdera vilken enantiomertopp som utvärderas av instrumentets datasystem. Förfarandet gav relativa standardavvikelser vid tre olika koncentrationer (500, 2000 och 4000 ng/ml) på 0,4-7,2 % för amfetamin och från 0,5 till 4,0 % för metamfetamin. Med hjälp av en 1/X-viktad regression gav analysen ett linjärt intervall på 25-10 000 ng/ml. Ett liknande förfarande beskrevs för analys av MTPA-derivat av amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA och MDEA på en kapillärkolonn av 5 % fenylpolysiloxan (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) med följande GC-förhållanden: Ovenens temperatur ökades från 140°C i 0,5 min till 215°C vid 15°C/min i 1,5 min till 285°C vid 35°C/min där den hölls i 1,0 min. Injektorns och överföringsledningens temperaturer var 160°C respektive 260°C. Analysen gav ett linjärt intervall på 25-5 000 ng/ml för MDEA och 25-10 000 ng/ml för amfetamin, metamfetamin, MDA och MDMA. Variationen vid cutoff-koncentrationen (500 ng/mL) låg inom ±11 % för alla analyter.

Peters et al. beskrev en GC-MS-analys med kemisk jonisering med negativa joner för bestämning av amfetamin- och metamfetamin-enantiomerer i plasma eller serum. Enantiomererna derivatiserades med S-heptafluorobutyrylprolylklorid och separerades med hjälp av en GC. Metoden var linjär från 5 till 250 μg/L med en extraktionseffektivitet på 88,9-98,6 % med hjälp av en enkel extraktion i fast fas. GC-förhållandena var följande: 5 % fenylmetylsiloxankolonn (HP-5MS; 30 m×0,25 mm i.d.); temperatur i injektionsporten 280 °C; kolonntemperatur 100 °C, ökad till 180 °C vid 30 °C/min, till 230 °C vid 5 °C/min och till 310 °C vid 30 °C/min; överföringsledning 280 °C; NICI, metan (2 mL/min); källtemperatur 150 °C. De joner som övervakades var: m/z 399, 379 och 439 för amfetamin-d11 och m/z 388, 368 och 428 för amfetamin; (EMV ökar med 400 V) m/z 407, 387 och 447 för metamfetamin-d5 och m/z 402, 382 och 442 för metamfetamin. Den ökade känslighet som kemisk jonisering med negativa joner ger möjliggjorde användning av en provstorlek på 0,2 mL. I en senare publikation som beskriver MDMA:s metaboliska profil efter administrering av läkemedlet i en kontrollerad studie av samma författare beskrevs också en grundlig validering av analysen. I ett annat förfarande där NICI används beskriver Leis et al. också en metod för kvantitativ analys av enantiomerer av amfetamin i mänsklig plasma genom GC/negativ jon kemisk jonisering MS. Metoden var linjär inom intervallet 0,006-50 ng/mL. Efter en enkel vätskeextraktion av 1 ml plasma och derivatisering med (S)-heptafluorobutyrylprolylklorid användes följande GC-förhållanden: SGE-BPX5 kapillärkolonn av smält kiseldioxid (15 m×0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injektor 280°C, kolonntemperaturen var 100°C i 1 minut, följt av en ökning av 40°C/min till 180°C, 5°C/min från 180-195°C, 40°C/min till 310°C i 2 minuter, överföringsledning 315°C. Kemisk jonisering utfördes med metan med en emissionsström på 300 mA. Ioner som övervakades för denna farmakokinetiska studie var m/z 368,1 och 373,1 för amfetamin respektive intern standard.

Analys av MDMA och relaterade regioisomerer har beskrivits av flera författare, vilket bidrar till att säkerställa att dessa närbesläktade föreningar lätt kan särskiljas. Kombinationen av masspektrala egenskaper och särskilt det kromatografiska beteendet hos dessa analyter beskrivs av båda grupperna i förhållande till deras betydelse för en korrekt identifiering av dessa föreningar. Optimeringen visade att mycket långsamma programhastigheter gav den bästa separationen på opolära stationära faser, men att en körtid på över 85 minuter var opraktiskt. Användningen av kapillärkolonner med smal borrning och samma faser förbättrade analystiden till ungefär en halvtimme på grund av deras ökade upplösningsförmåga. Optimering av DB-35MS, en kolonn med polär stationär fas, gjorde det möjligt att lösa upp 10 sidokedje- och ringregioisomerer av MDMA på cirka 4,5 minuter .

.