Studieupplägg

I denna tvåarmiga, dubbelblinda, randomiserade studie kommer vi att rekrytera 60 gravida kvinnor i åldrarna 19-42 år som bor i Vancouver, BC, Kanada. Deltagarna kommer att randomiseras till att under 16 veckor dagligen komplettera med antingen 0,6 mg/dag folsyra eller en ekvimolär dos (0,625 mg/dag) av (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra (Fig. 2). Dosen på 0,6 mg motsvarar de nivåer som finns i ledande kommersiella märken av prenatala vitaminer (Materna®), vilket ökar generaliserbarheten av våra resultat. Interventionen på 16 veckor baserades på den uppskattade halveringstiden för folat i röda blodkroppar och syftar till att möjliggöra mätning av långsiktig folatstatus i röda blodkroppar (efter 12-16 veckor) . Alla deltagare kommer också att få en prenatal multivitamin som inte innehåller folat för att säkerställa att andra näringsämnen (t.ex. järn) är tillräckliga under graviditeten. Veneriska blodprover kommer att samlas in vid baslinjen och vid slutlinjen för att mäta primära resultatmått, inklusive serumfolat, RBC-folat och plasma UMFA; explorativa mått kommer att inkludera plasma S-adenosyl-methionin, S-adenosyl-homocystein, totalt homocystein, totalt cystein, metionin, B12-vitamin, pyridoxal-5-fosfat, fritt kolin och betain. Genotypning av MTHFR- (677 C > T, rs1801133, och 1298 A > C, rs1801131) och DHFR-varianterna (rs1643649 och rs70991108) samt en fullständig blodstatus kommer också att fastställas. Kvinnor kommer att ha möjlighet att fortsätta i studiens postpartum (explorativa) fas, där de vid slutbesöket kommer att få fler kosttillskott att ta fram till cirka en vecka efter förlossningen. Vid dag 5-7 postpartum kommer kvinnorna att lämna ett litet (3 ml) bröstmjölksprov och ett icke-fastande venöst blodprov. De resultat som utvärderas i bröstmjölken kommer att omfatta folatformer (UMFA, THF, 5-metyl-THF, 5-formyl-THF och 5,10-methenyl-THF) och FBP i mjölken. Resultaten som utvärderas i blodprovet efter förlossningen kommer att omfatta folat i röda blodkroppar och UMFA i plasma. Studieprotokollet har utarbetats i enlighet med 2013 års standardprotokoll: Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) riktlinjer (fig. 3) . Se Additional file 1 (SPIRIT Checklist) för ytterligare information.

Flödesdiagram för deltagare

Standardprotokollpunkter: Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) schema för rekrytering, interventioner och bedömningar

Det primära målet med denna pilotstudie är att få fram uppskattningar av förändringen i serumfolat, RBC-folat och UMFA efter tillskott av (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra och folsyra under 16 veckors graviditet för att informera om utformningen av en definitiv studie med adekvat effekt. Det sekundära målet är att få fram rekryterings- och deltagarsiffror för att underlätta utformningen och genomförbarheten av en slutgiltig studie. De explorativa målen för postpartumfasen är att kvantifiera andelen totalt folat i bröstmjölken som folsyra i varje grupp, utvärdera korrelationen mellan UMFA-plasma i mammans postpartumplasma och folsyra i bröstmjölken och utvärdera folatkoncentrationer i RBC efter förlossningen i varje grupp.

Deltagare, rekrytering och informerat samtycke

Inkluderingskriterier: (1) Gravid kvinna (singelgraviditet), (2) bosatt i Vancouverområdet, (3) ≤ 21 veckors graviditet vid tidpunkten för samtycke, (4) 19-42 år och (5) kan ge informerat samtycke.

Exklusionskriterier: (1) Gravid kvinna (singelgraviditet), (2) bosatt i Vancouverområdet, (3) ≤ 21 veckors graviditet vid tidpunkten för samtycke, (4) 19-42 år, och (5) kan ge informerat samtycke: (1) Förekommande medicinska tillstånd som är kända för att påverka moderns folatstatus (malabsorberande och inflammatoriska tarmsjukdomar, aktiv celiaki, gastrisk bypass-kirurgi, atrofisk gastrit, epilepsi, avancerad leversjukdom, njurdialys, diabetes mellitus typ 1 eller 2, sicklecellsdrag/anemi) ; (2) livsstilsfaktorer som är kända för att påverka moderns folatstatus (nuvarande rökning, alkoholkonsumtion, användning av fritidsdroger); (3) medelhög till hög risk för utveckling av en graviditet med NTD (gäller för kvinnor eller deras manliga partner): personlig eller familjehistoria (föräldrar eller syskon) av andra folatkänsliga medfödda avvikelser, personlig NTD-historia eller en tidigare graviditet som påverkats av NTD) ; (4) mediciner som är kända för att störa B-vitaminmetabolismen (kloramfenikol, metotrexat, metformin, sulfasalazin, fenobarbital, fenytoin, primidon, triamteren, barbiturater) ; (5) Body Mass Index (BMI) ≥ 30 kg/m2 före graviditeten; eller (6) allergi mot någon av ingredienserna i studiebidraget.

Sampelstorlek

Sampelstorleken beräknades utifrån det primära målet att uppskatta fördelningen (medelvärde ± standardavvikelse) av förändringen av de primära resultaten (serumfolat, RBC-folat och UMFA) efter 16 veckors tillskott. För att uppnå detta behöver vi 50 kvinnor (25 i varje grupp); ett urval på minst n = 50 är allmänt erkänt som adekvat för pilotstudier inom klinisk forskning . En inflation på 20 % kommer att läggas till för att ta hänsyn till deltagare som hoppar av eller förlorar sin uppföljning, vilket innebär att totalt 60 kvinnor (30 i varje grupp) kommer att rekryteras.

Rekrytering

Affischer kommer att visas på BC Women’s Hospital, på medicinska kliniker och förlossningskliniker och i detaljhandelsbutiker för gravida kvinnor (t.ex. förlossningskurser, fitnessstudior, mödravårdsbutiker) i hela Vancouver, BC, Kanada. Information om studien kommer att delas med personal och hälso- och sjukvårdspersonal, inklusive läkare, barnmorskor, sjuksköterskor och andra i förekommande fall. Reklam på sociala medier (Facebook och Instagram) kommer att användas och riktas till gravida kvinnor i åldern 19-42 år i det större Vancouver, BC-området.

Inhämtning av informerat samtycke och bekräftelse av lämplighet

Kvinnor som är intresserade av att delta kontaktar forskningskoordinatorn (KMC) direkt. Vid detta tillfälle kommer detaljer om studien, behörighet och informerat samtycke att beskrivas. De berättigade deltagare som vill delta i studien kommer att få ett studie-ID och deras baslinjebesök kommer att planeras. Deltagarna kommer att instrueras att fortsätta med eventuella nuvarande prenatala multivitamin/folattillskott fram till baslinjebesöket. Den valfria postpartumfasen i studien kommer att beskrivas i det informerade samtyckesformuläret; deltagare som väljer att fortsätta efter de primära 16 veckorna kommer dock att få ett separat samtyckesformulär att underteckna.

Studiebesök

Studiebesöken kommer att underlättas i Vancouver, BC, Kanada, vid University of British Columbia, Food, Nutrition and Health Building och i Clinical Research Evaluation Unit vid BC Children and Women’s Hospital. Baslinje (8-21 graviditetsveckor): Både deltagaren och forskningssamordnaren (KMC) kommer att underteckna det informerade samtyckesformuläret; en kopia kommer att skannas och skickas per e-post till deltagaren efter studiebesöket. Deltagarna kommer att fylla i ett frågeformulär för att samla in medicinska och näringsmässiga uppgifter samt demografiska data. Ett validerat frågeformulär om matfrekvens kommer att användas för att beräkna DFE. Vikt och längd kommer att mätas med hjälp av en elektronisk våg och en stadiometer och registreras med en noggrannhet på 0,1 kg respektive 0,10 m. Ett 12 ml, 3 timmars fastande venöst blodprov kommer att samlas in. Deltagarna kommer att få sina studietillskott (antingen folsyra eller (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra) och få en tilläggsdagbok för att registrera det dagliga intaget. Halvtid: Efter 8 veckor kommer alla kvinnor att kontaktas för att kontrollera att de följer reglerna, ta upp eventuella frågor eller problem och planera ett slutbesök. Slutlinje (24-37 graviditetsveckor): Ett 12 ml, 3 timmars fastande venöst blodprov kommer att samlas in, vikten kommer att mätas enligt beskrivningen ovan och deltagarna kommer att fylla i ett frågeformulär vid slutlinjen för att fastställa eventuella förändringar i hälsostatus eller läkemedelsanvändning sedan utgångsläget. Deltagarna kommer att lämna tillbaka sin dagbok om kosttillskott och alla kvarvarande kapslar kommer att räknas. Postpartum: Vid slutbesöket kan deltagare som planerar att amma och som har en fungerande hushållsfrysare fortsätta i studiens postpartumfas. När samtycke har erhållits med hjälp av en andra blankett för informerat samtycke kommer de att få kosttillskott att fortsätta ta fram till ungefär en vecka efter förlossningen och en ny kosttillskottsdagbok. Deltagarna kommer att få utbildning i hur man samlar in ett litet (3 ml) bröstmjölksprov i hemmet dag 5-7 efter förlossningen och de kommer att få allt material som behövs (beskrivs närmare i avsnittet ”Insamling och bearbetning av bröstmjölk” nedan). Deltagarna ska förvara sitt bröstmjölksprov i frysen och meddela forskningssamordnaren när det är redo att hämtas. Hämtning kommer att ske inom fyra dagar efter anmälan och ett venöst blodprov på 12 ml kommer att tas vid detta tillfälle. Kvinnorna kommer att instrueras att ta sitt folattillskott 2 timmar före insamlingen av både bröstmjölksprov och blodprov för att standardisera toppen i plasma UMFA (och eventuellt upptag av UMFA i bröstmjölk; tidpunkten för denna process är dock inte väl beskriven).

Studietillskott

Folsyra och (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra kommer att tillhandahållas separat från de prenatala multivitaminerna. Detta beslut fattades eftersom vissa kvinnor rapporterar intolerans när de konsumerar prenatala multivitaminer; detta beror vanligtvis på det höga järninnehållet och försvinner efter den första trimestern . Om tillfällig intolerans skulle uppstå kan deltagarna hoppa över eller ta en halv dos av sin multivitamin, samtidigt som de fortsätter att komplettera med den fulla dosen folat. Huvudingredienserna för folsyra och prenatala multivitaminer har tillhandahållits av Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada). Bulk (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra (Metafolin®) har tillhandahållits av Merck & Cie (Schaffhausen, Schweiz). Alla bulkingredienser har sammansatts till vegetabiliska gelkapslar hos Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada). Kapslarna med folsyra och (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra är identiska till utseendet för att möjliggöra dubbelblindning. Multivitaminet för prenatal ålder innehåller samma mikronäringsämnen som WN Pharmaceuticals Ltd.® Prenatal (NPN 80025456), förutom att folsyra har tagits bort. Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada) har gjort en sammanfattning av den övergripande kvaliteten på alla kosttillskott som ingår i studien, och detta har verifierats av Health Canada, med bekräftelse av doserna av folsyra och (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra med hjälp av högpresterande vätskekromatografi. Ett meddelande om godkännande för ansökan om kliniska prövningar (inlämningsnummer 244456) tillhandahölls av Health Canadas direktorat för naturliga och receptfria hälsoprodukter den 26 juli 2019.

Dubbelblindning, randomisering och tillhandahållande av kosttillskottspaket

En oberoende forskningsassistent från Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada) kommer att tilldela blinderingskoder (A eller B) till kosttillskotten av folsyra och (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra. Flaskor med folattillskott kommer att märkas med ”A” eller ”B” och ange att ”kapslarna är antingen folsyra eller folat”. Både deltagarna och det primära forskningsteamet kommer att vara blinda för tilldelningen av tillskotten, som kommer att avkodas först när de slutliga statistiska analyserna är klara. Randomiseringssekvensen kommer att skapas med hjälp av datorn av en oberoende statistiker, med användning av block om fyra som var och en innehåller två deltagare per tilläggsgrupp. Den primära forskargruppen kommer att vara blindad för randomiseringssekvensen. Vid varje deltagares baslinjebesök kommer forskningssamordnaren (KMC) att avblinda tilldelningen (A eller B) för det aktuella studie-ID:t endast för att ge de tilldelade studietillskotten. Vid baslinjen kommer deltagarna att få ett tilläggspaket som innehåller alla kapslar för 16-veckorsinterventionen; om deltagarna väljer att fortsätta till studiens postpartumfas kommer de att få fler kosttillskott vid slutbesöket för att fortsätta att ta fram till ~ 1 vecka postpartum.

Begångsmedicinering

När de väl är inskrivna finns det inga restriktioner för medicinering under hela interventionsperioden; alla mediciner måste dock rapporteras. Det enda undantaget kommer att vara folat/folsyra-innehållande kosttillskott, som inte kommer att tillåtas under hela interventionsperioden.

Strategier för att öka följsamheten

Gravida kvinnor tenderar att vara mycket motiverade och är i allmänhet intresserade av att delta i kliniska forskningsförsök . Enligt en undersökning från Public Health Agency of Canada kompletterar 94 % av kvinnorna i British Columbia med prenatala multivitaminer under graviditeten . Därför kommer deltagarna troligen att vara vana vid dagliga tillskott vid inskrivningen. Forskningssamordnaren (KMC) kommer att kontakta varje deltagare efter halva tiden (8 veckor efter baslinjebesöket) för att ta upp eventuella frågor eller funderingar. Dessutom kommer tilläggspaketet att möjliggöra organiserad förvaring av tillägg hemma och tilläggsdagboken kommer att fungera som en daglig påminnelse för att öka följsamheten under de 16 veckorna. Av dessa skäl förväntar vi oss en hög följsamhet (> 90 %) till studieprotokollet.

Blodprovstagning och bearbetning

Venösa blodprover (totalt 12 mL) kommer att samlas in i ett 6-mL etylendiamintetraättiksyra

(EDTA)-rör, ett 2-mL EDTA-rör och ett 4-mL serumrör (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) vid baslinjebesöken, slutbesöken och besöken efter förlossningen (om tillämpligt). Blodprovtagningarna vid baslinjen och vid sluttillfället kommer att ske efter tre timmars fasta. Denna tidsram är tillräcklig för att minska det förväxlande inflytandet från nyligen intaget av folat på serumkoncentrationerna. Blodprovet efter förlossningen (~ 1 vecka efter förlossningen) kommer att tas utan fasta, eftersom detta inte kommer att påverka folat i röda blodkroppar och minska belastningen på deltagarna. Efter insamlingen kommer rören att skyddas från ljus, vändas försiktigt enligt tillverkarens rekommendationer, placeras i en kylare och transporteras till laboratoriet för omedelbar behandling (inom 2 timmar efter insamlingen).

För beredning av helblodshemolysat kommer helblod (0,3 ml) att avlägsnas från EDTA-röret på 6 ml och spädas ut 1/11 genom att tillsätta 3,0 ml av en 1 %-ig askorbinsyrelösning och därefter inkuberas vid 37 °C i 30 minuter. EDTA-röret på 6 ml centrifugeras sedan vid 3 000 rpm i 15 minuter vid 4 °C. Plasma samlas upp och (endast för baslinje- och slutprover) det återstående innehållet i EDTA-röret på 6 ml bearbetas för isolering av mononukleära celler i perifert blod (PBMC) med hjälp av SepMate-protokollet för PBMC-isolering (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Kanada). EDTA-röret på 2 ml kommer att användas för en fullständig blodräkning. Serumröret på 4 ml kommer att lämnas i rumstemperatur i ~ 30 minuter (tills det koagulerar) och sedan centrifugeras vid 3000 rpm i 15 minuter vid 4 °C. Serum kommer att samlas upp. Alla alikvotar kommer att förvaras vid – 80 °C tills vidare analys.

Mjölkinsamling och bearbetning

Kvinnorna kommer att instrueras att samla in bröstmjölk dag 5-7 postpartum mellan 13:00 och 14:50 (eftersom den genomsnittliga folatkoncentrationen under denna tid tycks vara representativ för den genomsnittliga folatkoncentrationen under en 24-timmarsperiod) , 2-3 timmar efter deras sista fullständiga uttryckning. Deltagarna kommer att fullständigt utmönstra bröstmjölk (manuellt eller med elektrisk pump) från det högra bröstet. När bröstmjölken är utpressad instrueras kvinnorna att försiktigt virvla mjölken för att blanda den, och sedan överföra 0,5 ml med hjälp av en steril falkonpipett till två bärnstensfärgade kryoflaskor (som var och en innehåller 0,005 g askorbinsyra för en 1-procentig utspädning) och 1 ml till två bärnstensfärgade kryoflaskor. Alla kryoflaskor kommer att vara tydligt märkta vid 0,5 och 1 ml. Kvinnorna kommer att placera alla ampuller i en frysbox som kommer att förvaras i frysen i upp till fyra dagar. Proverna kommer att hämtas frysta och överföras till laboratoriet för förvaring vid – 80 °C tills vidare analys.

Laboratorieanalyser

Serumfolat (nmol/L) och RBC-folat (nmol/L) kommer att analyseras genom mikrobiologisk analys, enligt globala rekommendationer, med hjälp av den mikrotiterplattemetod som beskrivs av Molloy et.al . RBC-folat (nmol/L) kommer att beräknas med följande formel :

Biomarkörer i plasma inklusive UMFA (nmol/L), S-adenosyl-methionin (μmol/L), S-adenosyl homocystein (μmol/L), totalt homocystein (μmol/L), totalt cystein (μmol/L), metionin (μmol/L), fritt kolin (μmol/L) och betain (μmol/L) kommer att analyseras med hjälp av vätskekromatografi-masspektrometri . Vitamin B12 (pmol/L) kommer att analyseras med hjälp av en immunoanalysator. Pyridoxal-5-fosfat (nmol/L) kommer att analyseras med hjälp av vätskekromatografi-tandem-masspektrometri . Genvarianter kommer att genotypas med hjälp av TaqMan SNP-genotypningsanalyser . En fullständig blodräkning kommer att utföras med hjälp av en automatiserad hematologianalysator (Sysmex XNL-550). Bröstmjölkens folatformer (inklusive UMFA, THF, 5-metyl-THF, 5-formyl-THF och 5,10-methenyl-THF) kommer att kvantifieras med hjälp av vätskekromatografi-tandem-masspektrometri; totalt folat kommer att vara summan av dessa former . Koncentrationerna av FBP i bröstmjölk kommer att mätas med hjälp av en radioanalys med kompetitiv bindning (enligt beskrivning av Selhub et al.) .

Sammanfattning av de uppgifter som ska samlas in

Demografiska, medicinska och näringsmässiga uppgifter via strukturerade frågeformulär

Baslinjedatainsamlingen kommer att omfatta ålder, etnicitet, paritet, utbildning, yrke, hushållsinkomst, medicinska och medicinska anamneser, rapporterad vikt före graviditeten, allmän kost (inklusive veganskt, vegetariskt, ketogent, glutenfritt födointag och alla livsmedel/livsmedelsgrupper som undviks av någon anledning) och användning av kosttillskott. Insamlingen av slutdata kommer att omfatta eventuella förändringar i den allmänna hälsan eller läkemedelsanvändning sedan baslinjebesöket.

Anthropometri

BMI före graviditeten kommer att beräknas med hjälp av självrapporterad vikt före graviditeten och uppmätt längd. Deltagarnas mått kommer att tas vid baslinjen (vikt och längd) och vid slutlinjen (endast vikt) för beräkning av viktökning under graviditeten under hela interventionsperioden och total viktökning under hela graviditeten (med hjälp av självrapporterad vikt före graviditeten och uppmätt vikt vid slutlinjen).

Dietbedömning

Totala DFE (μg/dag) från livsmedelsfolater och kompletterande folsyra kommer att beräknas med hjälp av Block Folic Acid/Dietary Folate Equivalents Screener (NutritionQuest, Berkeley, CA, USA), ett validerat frågeformulär om matfrekvens .

Postpartumdata

Totala veckor av tillskott, graviditetsveckor vid förlossningen, följsamhet till protokollet för insamling av bröstmjölk och tidpunkten för folattillskott före insamling av bröstmjölk och blodprover efter förlossningen kommer att registreras.

Kriterier för tillbakadragande

Kriterier för tillbakadragande inkluderar spontant eller planerat avbrytande av graviditet, användning av ytterligare folat/folsyra-innehållande näringstillskott och efter en oönskad/allvarlig oönskad händelse som är förknippad med tillskotten/försöksinterventionen (enligt vad som bestäms av den kvalificerade undersökaren (CM)). Deltagarna kan också när som helst avbryta sin medverkan och ingen ytterligare information kommer att samlas in. Oavsett orsaken till utträdet kommer alla tidigare insamlade uppgifter att behållas för analys. Deltagare som föder barn före slutbesöket kommer att ha möjlighet att fortsätta i studiens postpartumfas, förutsatt att de fortsätter att dagligen komplettera med studiens kosttillskott.

Datahantering och sekretess

Alla data och biologiska prover kommer att identifieras med hjälp av varje deltagares studie-ID. Data med personliga identifierare kommer att lagras på en krypterad, lösenordsskyddad dator i ett säkert serverutrymme hos BC Children’s Hospital Research Institute. Uppgifter med personliga identifierare som inte längre är kopplade kommer att rensas och dubbelregistreras av forskningssamordnaren (KMC) och en oberoende forskningsassistent i REDCap (Research Electronic Data Capture) som finns hos BC Children’s Hospital Research Institute. KMC, JAH och CDK kommer att ha tillgång till den slutliga datamängden. Pappersdokument kommer att förvaras i ett låst arkivskåp och biologiska prover kommer att förvaras i en låst frys som finns i huvudforskarens laboratorium (CDK) vid University of British Columbia. Deltagarna kan få veta sin tilldelning av folattillskott och folatresultat från blod/bröstmjölk (om tillämpligt) (inklusive DFE, serum- och RBC-folat vid baslinjen, slutlinjen och efter förlossningen samt totala folatkoncentrationer i bröstmjölk) efter att de slutliga statistiska analyserna har slutförts.

Data och statistisk analys

Deskriptorisk statistik kommer att användas för deltagarnas baslinjedata. Kontinuerliga variabler kommer att rapporteras med medelvärde ± standardavvikelse (eller median och interkvartilområde om de inte är normalfördelade) och kategoriska variabler som absoluta tal per grupp och procent. Kapselräkning kommer att användas för att beräkna deltagarnas följsamhet och tilläggsdagboken kommer att användas för att ge en beskrivande inblick i hinder för följsamhet. Data kommer att bedömas med avseende på normalitet och omvandlingar eller användning av motsvarande icke-parametriska tester kommer att övervägas om data inte följer en normalfördelning. Statistiska analyser kommer att utföras med hjälp av Stata (StataCorp, College Station, TX, USA). Alla analyser kommer inledningsvis att genomföras med avsikt att behandla enligt den ursprungliga grupptilldelningen vid baslinjen och utan någon imputering för saknade uppgifter. Sekundära per-protokoll-analyser kommer att utföras inklusive de som har slutfört studien fullt ut och följt studieprotokollet. Multipel imputering kommer att användas för att korrigera saknade data vid behov i känslighetsanalyser .

Primäranalyser

Vi kommer att beräkna medelvärdet ± standardavvikelsen för primära utfall (serumfolat, RBC-folat och plasma-UMFA) i varje grupp vid baslinjen och vid slutlinjen, samt medelvärdet ± standardavvikelsen för förändringen inom kvinnan i dessa utfall i varje grupp. Dessa uppskattningar kommer att användas för att informera om beräkningen av urvalsstorleken för den slutgiltiga studien.

Sekundära analyser

Explorativa analyser av primära utfall kommer att utföras med hjälp av en multipel linjär regressionsmodell för att undersöka om förändringen från baslinjen till slutlinjen skiljde sig åt beroende på behandlingsstatus, med justering för baslinjevärden och förklarande variabler (DFE, explorativa biomarkörer, graviditetsveckor vid initiering av tillskott). Andelen kvinnor med UMFA ≥ 0,2 nmol/L (anses vara en detekterbar koncentration) vid baslinjen och slutlinjen i varje grupp kommer också att beräknas. För att informera vårt sekundära mål kommer den totala deltagandegraden i studien att uppskattas genom att dividera det totala antalet inskrivna kvinnor med det totala antalet kvinnor som var intresserade av att delta. Rekryteringsgraden per vecka kommer att uppskattas genom att dividera det totala antalet kvinnor som deltog i studien med det totala antalet veckor som det tog att rekrytera dem. Antalet deltagare som stannar kvar kommer att uppskattas genom att dividera antalet kvinnor som fullföljer hela studien med det totala antalet kvinnor som rekryterats. För varje rekryteringsstrategi (inklusive affischer, sociala medier och muntlig information) kommer den totala räckvidden (endast sociala medier), antalet förfrågningar, antalet deltagare och kostnader att utvärderas. Oddsen för att bli inskriven efter en förfrågan för varje strategi kommer att utvärderas med hjälp av ett oddskvotstal. Om möjligt kommer skälen till att inte anmäla sig att registreras.

Postpartumanalyser

Vi kommer att beräkna medelvärdet ± standardavvikelsen för andelen folsyra i bröstmjölk (genom att dividera koncentrationen av folsyra i bröstmjölk med summan av alla former av folat i bröstmjölk) och för mödrarnas RBC-folat i bröstmjölken efter födseln. Linjär regression kommer att användas för att uppskatta sambandet mellan koncentrationen av folsyra i bröstmjölk och plasma-UMFA hos modern efter födseln. Resultaten efter förlossningen kommer att analyseras ytterligare med hjälp av multipel linjär regression, med justering för slutvärden och förklarande variabler (DFE, totalt antal veckors tillskott, följsamhet till protokollet för insamling av bröstmjölk).

Säkerhet

Folsyra tillhandahålls i en dos som uppfyller de kanadensiska rekommendationerna för gravida kvinnor (0,4-1,0 mg/dag); anses därför vara en låg risk. Kalciumsaltet av (6S)-5-metyltetrahydrofolsyra erkänns som säkert och ingår i kanadensiska prenatala multivitaminer utan någon fastställd tolerabel övre gräns (ingen risk för skada är för närvarande känd). Randomisering kommer att ske mellan 8 och 21 veckors graviditet (efter stängning av neuralröret). Med tanke på den låga risken med denna pilotstudie ansågs det inte nödvändigt att tillsätta en övervakningskommitté för dataövervakning. Alla säkerhetsfrågor och, vid behov, beslutet att avsluta studien kommer att behandlas av huvudforskarna (CDK och JAH) och en kvalificerad forskare (CM) och rapporteras till forskningsetiska nämnden och Health Canada. Upphävande av blindningen av interventionskoderna kan göras när som helst om det anses nödvändigt för övervakning av deltagarnas säkerhet.