Testul Limulus Amebocyte Lysate (LAL) este o metodă de detectare și cuantificare a endotoxinelor bacteriene, utilizată pe scară largă de industria farmaceutică și biotehnologică. Principiul biochimic al testului se bazează pe reacția de coagulare a hemolimfei de Limulus polyphemus, cunoscut în mod obișnuit sub numele de crab cu potcoavă din Atlantic, în prezența antigenelor cu suprafață microbiană, cum ar fi lipopolizaharidele sau endotoxinele bacteriene.

Compania „Wako Chemicals” se numără printre companiile care fabrică reactivi LAL la nivel internațional datorită formulei unice a unui reactiv LAL specific endotoxinelor bacteriene, fără interferența betaglucanilor din probe, datorită adaosului de Curdlan carboximetilat (CMC) coliofilizat cu LAL. Sub marca PYROSTAR™, această companie distribuitoare de reactivi de cercetare produce și comercializează reactivi LAL și accesorii care respectă toate normele, reglementările și standardele de calitate stabilite de FDA din SUA.

Vom vorbi acum despre diferiți reactivi și accesorii cu care Wako contribuie la studiul endotoxinelor bacteriene:

În primul rând, avem kitul Limulus PS Simple Test, care permite detectarea și cuantificarea endotoxinelor fără interferența altor substanțe coexistente, cu ajutorul unui adsorbant de afinitate pentru endotoxine numit Pyrosep™. Cu această metodă, putem măsura endotoxina într-o probă lipofilă, cu condiția ca aceasta să poată fi dizolvată în etanol, cum ar fi vitaminele liposolubile, uleiurile și grăsimile, albuminele etc., care în mod normal nu pot fi măsurate cu un test Limulus convențional. Mai mult, nu se risipește niciun reactiv LAL, deoarece acesta este aplicat individual în flacoanele testului simplu și poate fi utilizat în cantitatea exactă necesară pentru măsurare.

Seria PYROSTAR™ ES-F este o formulă unică ce conține Curdlan carboximetilat (CMC) coliofilizat cu LAL cu scopul de a elimina interferența cu β-glucani. Tamponul ES dezvoltat de Wako conține concentrații ridicate de CMC, transformându-se într-un reactiv LAL specific pentru endotoxine. Acest reactiv este conceput pentru a fi utilizat atât în detectarea calitativă a endotoxinelor prin metoda gel-clot, cât și pentru detectarea cantitativă a acestora prin metodele turbidimetrice cinetice (KTA). Pentru măsurarea vitezei de schimbare a turbidității se utilizează un instrument fotometric numit Toxinometer®, dezvoltat de Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Kiturile PYROSTAR™ ES-F sunt disponibile cu și fără Endotoxina de control standard (SCE): un reactiv liofilizat rafinat din E.coli și utilizat pentru a confirma sensibilitatea reactivului LAL, pentru a valida metodele de testare a produsului și pentru a pregăti controale de inhibiție.

Pentru a sprijini acești reactivi, Wako dezvoltă, de asemenea, o soluție de extracție a endotoxinei capabilă să extragă endotoxinele de pe suprafețe unde acestea nu pot fi extrase cu apă sau sare. Utilizarea sa este recomandată în cazul probelor de endotoxine de pe echipamente și dispozitive care ar putea fi în contact cu lichide care conțin sânge sau proteine.

Toxinometer® ET-6000 este un cititor computerizat de incubare cinetică care poate încorpora 3 metode de testare: gel-clot, KTA și KCA (test cinetic cromogenic). Acest echipament ne permite să obținem rezultate gel-clot și KTA din aceeași probă. Acesta măsoară simultan până la 16 probe cu un risc de contaminare mult mai mic decât cel al microplăcilor și ne permite să arhivăm curbele standard. Toximaster® QC7 este softul care asigură toate funcțiile de procesare a datelor și de întocmire a rapoartelor pentru testul LAL cu Toxinometer® ET-6000.

În plus, printre accesoriile din cataloagele LAL de la Wako, vedem și eprubete cu și fără capac de aluminiu. Aceste tuburi sunt produse fără endotoxine, fabricate din sticlă borosilicată și concepute pentru metoda gel-clot. Grosimea sticlei poate fi calibrată în mod specific la Toxinometru pentru o intensitate și o transmisie stabilă a luminii.

Un alt reactiv LAL comercializat de Wako este kitul KY Color Limulus. Acest reactiv a fost conceput pentru metoda KCA și poate fi utilizat atât în cititorul cinetic, cât și într-un cititor de microplăci. Acesta include un kit de teste multiple și un kit de teste simple, fiecare conceput pentru o analiză colorimetrică bazată pe timp, folosind un substrat sintetic care generează o culoare galbenă și care poate detecta în mod specific endotoxina cu o sensibilitate ridicată.

Bibliografie:

1) Iwanaga, S. Principiul biochimic al testului Limulus pentru detectarea endotoxinelor bacteriene. Proceedings of the Japan Academy, Series B, 83(4), 110-119. (2007).

2) Ghidul privind validarea testului Limulus Amebocyte Lysate Test ca test de testare a endotoxinelor din produsele finale ale medicamentelor parenterale, produselor biologice și dispozitivelor medicale umane și animale. U.S. Dept. of Health & Human Services, FDA, decembrie (1987).

3) Katsuhito Inoue, Aya Takaoka, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 110 (1992), a 6-a reuniune anuală a Societății japoneze pentru alternative la experimentele pe animale (6th Annual Meeting of the Japanese Society for Alternatives to Animal Experiments).

4) Katsuhito Inoue, Tomoaki Harada, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 44 (1994), a 21-a reuniune anuală a Societății pentru agenți antibacterieni și antifungici.

5) Tsuchiya, M.; Oishi, H.; Takaoka, A.; Fusamoto, M. y Matsuura, S. Discriminarea între endotoxină și (1-3) beta-D-glucan folosind testul cinetic turbidimetric cu lizatul de amebocite Limulus. Chem Pahrm Bull (Tokyo), 38(9). 2523. (1990).

LINEA DE PRODUSE LAL

LAL Reagent Kit	LAL Accesorii

.