Designul studiului

În acest studiu cu două brațe, dublu-orb, randomizat, vom recruta 60 de femei însărcinate cu vârste cuprinse între 19 și 42 de ani care locuiesc în Vancouver, BC, Canada. Participantele vor fi randomizate să suplimenteze zilnic, timp de 16 săptămâni, fie cu 0,6 mg/zi de acid folic, fie cu o doză echimolară (0,625 mg/zi) de acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic (Fig. 2). Doza de 0,6 mg va corespunde nivelurilor găsite în principalele mărci comerciale de vitamine prenatale (Materna®), crescând astfel generalizabilitatea constatărilor noastre. Intervenția de 16 săptămâni s-a bazat pe timpul de înjumătățire estimat al folatului din RBC și intenționează să permită măsurarea statutului de folat pe termen lung în RBC (după 12-16 săptămâni) . Toți participanții vor primi, de asemenea, o multivitamină prenatală care nu conține folat, pentru a asigura adecvarea altor nutrienți (de exemplu, fier) în timpul sarcinii. Probele de sânge venos în post vor fi recoltate la momentul inițial și final pentru a măsura măsurile primare de rezultat, inclusiv folatul seric, folatul RBC și UMFA plasmatic; măsurile exploratorii vor include S-adenozil-metionina plasmatică, S-adenozil-homocisteina, homocisteina totală, cisteina totală, metionina, vitamina B12, piridoxal-5-fosfat, colina liberă și betaina. Se va determina, de asemenea, genotiparea variantelor MTHFR (677 C > T, rs1801133, și 1298 A > C, rs1801131) și DHFR (rs1643649 și rs70991108), precum și o hemogramă completă. Femeile vor avea opțiunea de a continua în faza postpartum (exploratorie) a studiului, unde, la vizita finală, li se vor da mai multe suplimente pe care să le ia până la aproximativ 1 săptămână postpartum. În zilele 5-7 postpartum, femeile vor furniza o mostră mică (3 ml) de lapte matern și o mostră de sânge venos care nu se află la repaus. Rezultatele evaluate în laptele matern vor include formele de folat (UMFA, THF, 5-metil-THF, 5-formil-THF și 5,10-metenil-THF) și FBP din lapte. Rezultatele evaluate în proba de sânge postpartum vor include folatul RBC și UMFA din plasmă. Protocolul studiului a fost elaborat în conformitate cu Standard Protocol Items 2013: Recomandare pentru studii intervenționale (SPIRIT) (Fig. 3) . A se vedea fișierul suplimentar 1 (Lista de verificare SPIRIT) pentru mai multe detalii.

Diagrama de flux a participanților

Elemente standard de protocol: Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) program de înscriere, intervenții și evaluări

Obiectivul principal al acestui studiu pilot este de a obține estimări pentru modificarea folatului seric, a folatului din RBC și a UMFA în urma suplimentării cu acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic și acid folic timp de 16 săptămâni de sarcină pentru a informa proiectarea unui studiu definitiv cu putere adecvată. Obiectivul secundar este de a obține ratele de recrutare și de participare pentru a ajuta la proiectarea și fezabilitatea unui studiu definitiv. Obiectivele exploratorii ale fazei postpartum sunt de a cuantifica proporția de folat total din laptele matern sub formă de acid folic în fiecare grup, de a evalua corelația dintre UMFA din plasma maternă postpartum și acidul folic din laptele matern și de a evalua concentrațiile de folat din RBC după naștere în fiecare grup.

Participanți, recrutare și consimțământ informat

Criterii de includere: (1) femeie însărcinată (sarcină unică); (2) care locuiește în zona metropolitană Vancouver; (3) ≤ 21 săptămâni de gestație la momentul acordării consimțământului; (4) cu vârsta cuprinsă între 19 și 42 de ani; și (5) capabilă să ofere consimțământul informat.

Criterii de excludere: (1) afecțiuni medicale preexistente cunoscute ca având un impact asupra statusului de folat matern (boli intestinale malabsorbante și inflamatorii, boala celiacă activă, operație de bypass gastric, gastrită atrofică, epilepsie, boală hepatică avansată, dializă renală, diabet zaharat de tip 1 sau 2, trăsătură de celule secerătoare/anemie) ; (2) factori de stil de viață cunoscuți ca având un impact asupra statusului matern de folat (fumatul actual, consumul de alcool, consumul de droguri recreaționale) ; (3) faptul de a avea un risc mediu sau ridicat de a dezvolta o sarcină afectată de NTD (se aplică femeilor sau partenerului lor de sex masculin: antecedente personale sau familiale (părinți sau frați) de alte anomalii congenitale sensibile la folat, antecedente personale de NTD sau o sarcină anterioară afectată de NTD) ; (4) medicamente cunoscute ca interferând cu metabolismul vitaminelor B (cloramfenicol, metotrexat, metformină, sulfasalazină, fenobarbital, fenitoină, primidonă, triamteren, barbiturice) ; (5) indice de masă corporală (IMC) înainte de sarcină ≥ 30 kg/m2; sau (6) alergie la oricare dintre ingredientele suplimentului studiat.

Dimensiunea eșantionului

Dimensiunea eșantionului a fost calculată pe baza obiectivului primar de a estima distribuția (media ± deviația standard) a modificării rezultatelor primare (folat seric, folat RBC și UMFA) după 16 săptămâni de administrare a suplimentelor. Pentru a realiza acest lucru, vom avea nevoie de 50 de femei (25 în fiecare grup); un eșantion de cel puțin n = 50 este în general recunoscut ca fiind adecvat pentru studiile pilot de cercetare clinică . Se va adăuga o inflație de 20% pentru a ține cont de participanții care abandonează sau de pierderea urmăririi; astfel, va fi recrutat un total de 60 de femei (30 în fiecare grup).

Recrutare

Posturile vor fi afișate la BC Women’s Hospital, în clinicile medicale și prenatale și în unitățile de vânzare cu amănuntul pentru femeile însărcinate (de exemplu, cursuri prenatale, studiouri de fitness, magazine de îmbrăcăminte pentru gravide) în Vancouver, BC, Canada. Detaliile studiului vor fi comunicate personalului și profesioniștilor din domeniul sănătății, inclusiv medicilor, moașelor, asistentelor medicale și altor persoane, după caz. Publicitatea pe rețelele de socializare (Facebook și Instagram) va fi utilizată și orientată către femeile însărcinate cu vârste cuprinse între 19 și 42 de ani din zona metropolitană Vancouver, BC.

Obținerea consimțământului informat și confirmarea eligibilității

Femeile interesate să participe vor contacta direct coordonatorul cercetării (KMC). În acest moment, vor fi descrise detaliile studiului, eligibilitatea și consimțământul informat. Participantele eligibile care doresc să fie înrolate vor primi un ID al studiului și va fi programată vizita lor inițială. Participantele vor fi instruite să continue orice suplimentație actuală de multivitamine/folatină prenatală până la vizita de referință. Faza opțională postpartum a studiului va fi descrisă în formularul de consimțământ în cunoștință de cauză; cu toate acestea, participantele care aleg să continue după cele 16 săptămâni primare vor primi un formular de consimțământ separat pe care îl vor semna.

Vizitele de studiu

Vizitele de studiu vor fi facilitate în Vancouver, BC, Canada, la University of British Columbia, Food, Nutrition and Health Building și în Unitatea de evaluare a cercetării clinice de la BC Children and Women’s Hospital. Nivel de bază (8-21 săptămâni de gestație): Atât participantul, cât și coordonatorul cercetării (KMC) vor semna formularul de consimțământ în cunoștință de cauză; o copie va fi scanată și trimisă prin e-mail participantului după vizita de studiu. Participantele vor completa un chestionar de bază pentru a surprinde istoricul medical și nutrițional și datele demografice. Un chestionar validat de frecvență alimentară va fi utilizat pentru a calcula DFEs . Greutatea și înălțimea vor fi luate cu ajutorul unui cântar electronic și al unui stadiometru și vor fi înregistrate cu o precizie de 0,1 kg și, respectiv, 0,10 m. Se va recolta o probă de sânge venos de 12 ml, la 3 ore de post. Participanții vor primi suplimentele pentru studiu (fie acid folic, fie acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic) și vor primi un jurnal de suplimente pentru a înregistra consumul zilnic. Punct intermediar: după 8 săptămâni, toate femeile vor fi contactate pentru a verifica conformitatea, pentru a răspunde la orice întrebări sau preocupări și pentru a programa o vizită finală. Endline (24-37 săptămâni de gestație): se va recolta o mostră de sânge venos de 12 ml, la 3 ore de post, greutatea va fi măsurată conform descrierii de mai sus, iar participantele vor completa un chestionar endline pentru a determina orice modificări ale stării de sănătate sau ale utilizării medicamentelor de la momentul inițial. Participanții vor returna jurnalul de suplimente și toate capsulele rămase vor fi numărate. Postpartum: la vizita endline, participantele care intenționează să alăpteze și care au un congelator casnic funcțional pot continua în faza postpartum a studiului. După obținerea consimțământului cu ajutorul unui al doilea formular de consimțământ în cunoștință de cauză, acestea vor primi suplimente pe care vor continua să le ia până la aproximativ 1 săptămână postpartum și un nou jurnal de suplimente. Participantele vor fi instruite cu privire la modul în care trebuie să colecteze o mică mostră de lapte matern (3 ml) la domiciliul lor în zilele 5-7 postpartum și li se vor da toate consumabilele necesare (descrise mai detaliat în secțiunea „Colectarea și prelucrarea laptelui matern” de mai jos). Participantele își vor păstra proba de lapte matern în congelator și vor anunța coordonatorul de cercetare atunci când aceasta este gata pentru a fi preluată. Ridicarea va avea loc în termen de 4 zile de la notificare și o probă de sânge venos de 12 ml va fi prelevată în acest moment. Femeile vor fi instruite să își ia suplimentul de acid folic cu 2 h înainte de recoltarea atât a probelor de lapte matern, cât și a probelor de sânge, pentru a standardiza vârful de UMFA din plasmă (și, potențial, absorbția UMFA în laptele matern; cu toate acestea, momentul acestui proces nu este bine descris).

Suplimentele de studiu

Acidul folic și acidul (6S)-5-metiltetrahidrofolic vor fi furnizate separat de multivitaminele prenatale. Această decizie a fost luată deoarece unele femei raportează intoleranță atunci când consumă multivitamine prenatale; aceasta se datorează de obicei conținutului ridicat de fier și se rezolvă după primul trimestru . În cazul în care apare o intoleranță temporară, participantele pot sări peste sau pot lua o jumătate de doză din multivitaminele lor, continuând în același timp să suplimenteze cu doza completă de folat. Ingredientele de bază pentru acidul folic și multivitaminele prenatale au fost furnizate de Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada). Acidul (6S)-5-metiltetrahidrofolic în vrac (Metafolin®) a fost furnizat de Merck & Cie (Schaffhausen, Elveția). Toate ingredientele în vrac au fost compuse în capsule de gel vegetal la Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada). Capsulele de acid folic și de acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic au un aspect identic, pentru a permite un dublu-orbire. Multivitamina prenatală conține aceeași formulă de micronutrienți ca și WN Pharmaceuticals Ltd.® Prenatal (NPN 80025456), cu excepția faptului că acidul folic a fost eliminat. Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada) a realizat un rezumat global al calității pentru toate suplimentele din studiu și a fost verificat de Health Canada, cu confirmarea dozelor de acid folic și acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic prin cromatografie lichidă de înaltă performanță. Un aviz de autorizare pentru cererea de studii clinice (cererea nr. 244456) a fost furnizat de către Direcția pentru produse de sănătate naturale și fără prescripție medicală din cadrul Health Canada la 26 iulie 2019.

Dupla orbire, randomizare și furnizarea pachetelor de suplimente

Un asistent de cercetare independent de la Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada) va atribui coduri de orbire (A sau B) pentru suplimentele de acid folic și acid (6S)-5-metiltetrahidrofolic. Sticlele cu suplimente de acid folic vor fi etichetate cu „A” sau „B” și vor indica faptul că „capsulele sunt fie acid folic, fie folat”. Atât participanții, cât și echipa de cercetare primară vor fi orbiți în ceea ce privește alocarea suplimentelor, care va fi decodificată doar după finalizarea analizelor statistice finale. Secvența de randomizare va fi generată pe calculator de către un statistician independent, folosind blocuri de patru care conțin fiecare câte doi participanți pentru fiecare grup de suplimente. Echipa de cercetare primară va fi orbită în ceea ce privește secvența de randomizare. La vizita inițială a fiecărui participant, coordonatorul de cercetare (KMC) va dezvălui alocarea (A sau B) pentru acel ID de studiu doar pentru a furniza suplimentele alocate pentru studiu. La linia de bază, participantele vor primi un pachet de suplimente care va conține toate capsulele pentru intervenția de 16 săptămâni; dacă participantele aleg să continue până la faza postpartum a studiului, la vizita de final vor primi mai multe suplimente pe care vor continua să le ia până la ~ 1 săptămână postpartum.

Medicamente concomitente

După ce vor fi înrolate, nu vor exista restricții privind administrarea de medicamente pe toată perioada de intervenție; cu toate acestea, toate medicamentele trebuie să fie raportate. Singura excepție vor fi suplimentele nutritive care conțin acid folic/folic, care nu vor fi permise pe toată perioada de intervenție.

Strategii pentru a spori aderența

Femeile însărcinate tind să fie foarte motivate și sunt în general interesate să participe la studii de cercetare clinică . Conform unui sondaj al Agenției de Sănătate Publică din Canada, 94% dintre femeile din British Columbia completează cu multivitamine prenatale în timpul sarcinii . Prin urmare, participanții vor fi probabil obișnuiți cu suplimentarea zilnică în momentul înscrierii. Coordonatorul de cercetare (KMC) va contacta fiecare participant la jumătatea perioadei (la 8 săptămâni după vizita de referință) pentru a răspunde la orice întrebări sau preocupări. În plus, pachetul de suplimente va permite depozitarea organizată a suplimentelor la domiciliu, iar jurnalul de suplimente va servi ca un memento zilnic pentru a spori aderența pe parcursul celor 16 săptămâni. Din aceste motive, anticipăm o aderență ridicată (> 90%) la protocolul de studiu.

Coletarea și prelucrarea probelor de sânge

Se vor colecta probe de sânge venos (12 ml în total) într-un tub de 6 ml de acid etilendiaminotetraacetic

(EDTA), un tub de 2 ml de EDTA și un tub de 4 ml de ser (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, SUA) la vizitele inițiale, finale și postpartum (dacă este cazul). Prelevările de sânge de la linia de bază și de la linia finală vor avea loc după un post de 3 ore; acest interval de timp este suficient pentru a reduce influența de confuzie a aportului recent de folat asupra concentrațiilor serice. Proba de sânge postpartum (~ 1 săptămână postpartum) va fi fără post, deoarece acest lucru nu va influența folatul din RBC și va reduce povara asupra participanților. După recoltare, tuburile vor fi ferite de lumină, inversate ușor conform recomandărilor producătorilor, plasate într-o ladă frigorifică și transportate la laborator pentru procesare imediată (în termen de 2 h de la recoltare).

Pentru prepararea hemolizatului de sânge integral, sângele integral (0,3 ml) va fi extras din tubul EDTA de 6 ml și diluat 1/11 prin adăugarea a 3,0 ml de soluție de acid ascorbic 1% și ulterior incubat la 37 °C timp de 30 min. Tubul EDTA de 6 ml va fi apoi centrifugat la 3000 rpm timp de 15 minute la 4 °C. Plasma va fi colectată și (numai pentru probele de bază și de sfârșit de linie) conținutul rămas în tubul EDTA de 6 ml va fi procesat pentru izolarea celulelor mononucleare din stratul de sânge periferic (PBMC) cu protocolul de izolare SepMate PBMC (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada). Tubul EDTA de 2 ml va fi utilizat pentru o hemogramă completă. Tubul de ser de 4 ml va fi lăsat la temperatura camerei timp de ~ 30 de minute (până la coagulare) și apoi va fi centrifugat la 3000 rpm timp de 15 minute la 4 °C; se va colecta serul. Toate alicotele vor fi păstrate la – 80 °C până la analize ulterioare.

Colectarea și procesarea laptelui matern

Femeile vor fi instruite să colecteze laptele matern în zilele 5-7 postpartum între orele 13:00 și 14:50 (deoarece concentrația medie de folat în acest interval de timp pare a fi reprezentativă pentru concentrațiile medii de folat pe o perioadă de 24 h) , la 2-3 h după ultima exprimare completă. Participantele vor extrage complet laptele matern (manual sau cu ajutorul unei pompe electrice) din sânul drept. După ce laptele matern este exprimat, femeile vor fi instruite să învârtă ușor laptele pentru a-l amesteca, iar apoi, folosind o pipetă falcon sterilă, vor transfera 0,5 ml în două crioviale de chihlimbar (fiecare conținând 0,005 g de acid ascorbic pentru o diluție de 1%) și 1 ml în două crioviale de chihlimbar. Toate criovialele vor fi marcate în mod clar la nivelurile de 0,5 și 1 ml. Femeile vor plasa toate fiolele într-o cutie de congelare care va fi depozitată în congelator timp de până la 4 zile. Probele vor fi preluate congelate și transferate în laborator pentru a fi depozitate la – 80 °C până la analize ulterioare.

Analize de laborator

Folatul seric (nmol/L) și folatul RBC (nmol/L) vor fi analizate prin analiză microbiologică, așa cum se recomandă la nivel mondial, folosind metoda cu plăci de microtitrare prezentată de Molloy et.al . Folatul RBC (nmol/L) va fi calculat cu următoarea formulă :

Bimarkeri plasmatici, inclusiv UMFA (nmol/L), S-adenozil-metionină (μmol/L), S-adenozil-homocisteină (μmol/L), homocisteina totală (μmol/L), cisteina totală (μmol/L), metionina (μmol/L), colina liberă (μmol/L) și betaina (μmol/L) vor fi analizate cu ajutorul spectrometriei de masă prin cromatografie lichidă . Vitamina B12 (pmol/L) va fi analizată cu ajutorul unui imunoanalizator. Piridoxal-5-fosfat (nmol/L) va fi analizat prin cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem . Variantele genetice vor fi genotipate prin utilizarea testelor de genotipare TaqMan SNP . Se va efectua o hemogramă completă cu ajutorul unui analizor hematologic automat (Sysmex XNL-550). Formele de folat din laptele matern (inclusiv UMFA, THF, 5-metil-THF, 5-formil-THF și 5,10-metil-THF) vor fi cuantificate prin cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem; folatul total va reprezenta suma acestor forme . Concentrațiile de FBP din laptele matern vor fi măsurate cu ajutorul unei proceduri de radiotest cu legare competitivă (așa cum a fost descrisă de Selhub et al.) .

Rezumat al datelor care vor fi colectate

Date demografice, medicale și de nutriție prin intermediul unor chestionare structurate

Colectarea datelor de bază va include vârsta, etnia, paritatea, educația, ocupația, venitul gospodăriei, istoricul medical și medicamentos, greutatea raportată înainte de sarcină, dieta generală (inclusiv consumul de alimente vegane, vegetariene, ketogenice, fără gluten și orice alimente/grupuri de alimente evitate din orice motiv) și utilizarea de suplimente. Colectarea datelor finale va include orice modificări ale stării generale de sănătate sau ale utilizării medicamentelor de la vizita de referință.

Antropometrie

IMC înainte de sarcină va fi calculat folosind greutatea auto-raportată înainte de sarcină și înălțimea măsurată. Măsurătorile participantelor vor fi efectuate la momentul inițial (greutate și înălțime) și la final (doar greutatea) pentru calcularea creșterii ponderale gestaționale pe parcursul perioadei de intervenție și a creșterii ponderale totale pe parcursul sarcinii (utilizând greutatea auto-raportată înainte de sarcină și greutatea măsurată la finalul sarcinii).

Evaluare dietetică

DFE totale (μg/zi) din folați alimentari și acid folic suplimentar vor fi calculate cu ajutorul Block Folic Acid/Dietary Folate Equivalents Screener (NutritionQuest, Berkeley, CA, SUA), un chestionar validat de frecvență alimentară .

Date postpartum

Se vor înregistra săptămânile totale de suplimentare, săptămânile de gestație la naștere, respectarea protocolului de recoltare a laptelui matern și momentul suplimentării cu folat înainte de recoltarea laptelui matern și a probelor de sânge postpartum.

Criterii de retragere

Criteriile de retragere includ întreruperea spontană sau planificată a sarcinii, utilizarea de suplimente nutriționale suplimentare care conțin acid folic/folat și în urma unui eveniment advers/serios asociat cu suplimentele/intervenția din cadrul trialului (așa cum a fost stabilit de către investigatorul calificat (CM)). De asemenea, participanții se pot auto-retrage în orice moment și nu vor fi colectate alte informații. Indiferent de motivul retragerii, toate datele colectate anterior vor fi păstrate pentru analiză. Participantele care nasc înainte de vizita de încheiere a studiului vor avea opțiunea de a continua în faza postpartum a studiului, având în vedere că vor continua să se completeze zilnic cu suplimentele din studiu.

Manipulare și confidențialitate a datelor

Toate datele și probele biologice vor fi identificate cu ajutorul ID-ului de studiu al fiecărei participante. Datele cu identificatori personali vor fi stocate pe un computer criptat, protejat prin parolă, într-un spațiu de server securizat la BC Children’s Hospital Research Institute. Datele cu identificatori personali dezlegate vor fi curățate și vor fi completate de coordonatorul de cercetare (KMC) și de un asistent de cercetare independent în REDCap (Research Electronic Data Capture) găzduit de BC Children’s Hospital Research Institute. KMC, JAH și CDK vor avea acces la setul final de date. Documentele pe suport de hârtie vor fi păstrate într-un dulap de arhivare încuiat, iar probele biologice vor fi păstrate într-un congelator încuiat, găzduit în laboratorul cercetătorului principal (CDK) de la Universitatea din British Columbia. Participantelor li se poate comunica alocarea suplimentului de folat și rezultatele de folat din sânge/lapte maternale (dacă este cazul) (inclusiv DFE, folat seric și RBC la momentul inițial, final și postpartum, precum și concentrațiile totale de folat din laptele matern) după finalizarea analizelor statistice finale.

Analiză de date și analiză statistică

Statistica descriptivă va fi utilizată pentru datele inițiale ale participantelor. Variabilele continue vor fi raportate cu o medie ± deviație standard (sau mediana și intervalul intercuartil dacă nu sunt distribuite normal) și variabilele categorice ca numere absolute per grup și procente. Numărătoarea capsulelor va fi utilizată pentru a calcula aderența participanților, iar jurnalul suplimentelor va fi utilizat pentru a oferi o perspectivă descriptivă asupra barierelor de aderență. Datele vor fi evaluate din punct de vedere al normalității și se vor lua în considerare transformări sau utilizarea unor teste neparametrice echivalente dacă datele nu urmează o distribuție normală. Analizele statistice vor fi efectuate cu ajutorul Stata (StataCorp, College Station, TX, SUA). Toate analizele vor fi inițial finalizate pe baza principiului intenției de a trata, în conformitate cu alocarea inițială a grupului la momentul inițial și fără nicio imputație pentru datele lipsă. Analizele secundare per-protocol vor fi efectuate incluzând pe cei care au finalizat complet studiul și au aderat la protocolul de studiu. Se va utiliza imputația multiplă pentru a corecta datele lipsă, după caz, în analizele de sensibilitate .

Analize primare

Vom calcula media ± abaterea standard pentru rezultatele primare (folat seric, folat RBC și UMFA plasmatic) în fiecare grup la momentul inițial și final, precum și media ± abaterea standard a modificării în interiorul femeii a acestor rezultate în fiecare grup. Aceste estimări vor fi utilizate pentru a informa calculul dimensiunii eșantionului studiului definitiv.

Analize secundare

Analizele exploratorii ale rezultatelor primare vor fi efectuate cu ajutorul unui model de regresie liniară multiplă pentru a investiga dacă modificarea de la momentul inițial la cel final diferă în funcție de starea de tratament, ajustând valorile inițiale și variabilele explicative (DFE, biomarkeri exploratori, săptămâni de gestație la inițierea suplimentului). Se va calcula, de asemenea, proporția de femei cu UMFA ≥ 0,2 nmol/L (considerată o concentrație detectabilă) la momentul inițial și final în fiecare grup. Pentru a informa obiectivul nostru secundar, rata globală de participare la studiu va fi estimată prin împărțirea numărului total de femei înscrise la numărul total de femei care au fost interesate să participe. Rata de recrutare săptămânală va fi estimată prin împărțirea numărului total de femei înscrise la numărul total de săptămâni care au fost necesare pentru a le recruta. Rata de retenție a participantelor va fi estimată prin împărțirea numărului de femei care finalizează întregul studiu la numărul total de femei înscrise. Pentru fiecare strategie de recrutare (inclusiv afișe, social media, word of mouth), va fi evaluată raza totală de acțiune (doar social media), anchetele, înscrierile și costurile. Șansele de înscriere în urma unei anchete pentru fiecare strategie vor fi evaluate cu ajutorul unui odds ratio. După cum sunt disponibile, se vor înregistra motivele pentru neînscriere.

Analize postpartum

Se va calcula media ± deviația standard pentru proporția de acid folic în laptele matern (împărțind concentrația de acid folic din laptele matern la suma tuturor formelor de folat din laptele matern) și pentru folatul RBC matern postpartum. Regresia liniară va fi utilizată pentru a estima asocierea dintre concentrația de acid folic din laptele matern și UMFA din plasma maternă postpartum. Rezultatele postpartum vor fi analizate în continuare cu ajutorul regresiei liniare multiple, ajustând pentru valorile finale și variabilele explicative (DFE, numărul total de săptămâni de suplimentare, respectarea protocolului de colectare a laptelui matern).

Siguranță

Acidul folic este furnizat la o doză care respectă recomandările canadiene pentru femeile însărcinate (0,4-1,0 mg/zi); astfel, este considerat cu risc scăzut. Sarea de calciu a acidului (6S)-5-metiltetrahidrofolic este recunoscută ca fiind sigură și este inclusă în multivitaminele prenatale canadiene fără o limită superioară tolerabilă stabilită (nu se cunoaște în prezent niciun risc de nocivitate). Randomizarea va avea loc între 8 și 21 de săptămâni de gestație (după închiderea tubului neural). Având în vedere riscul scăzut al acestui studiu pilot, nu s-a considerat necesară constituirea unui comitet de monitorizare a datelor. Toate preocupările legate de siguranță și, dacă este necesar, decizia de a încheia studiul, vor fi abordate de către cercetătorii principali (CDK și JAH) și un cercetător calificat (CM) și vor fi raportate Comitetului de etică a cercetării și Health Canada. Declanșarea codurilor de intervenție poate fi întreprinsă în orice moment, dacă se consideră necesar pentru monitorizarea siguranței participanților.

.