3.4.2 Cromatografie gazoasă spiralată

A fost descrisă separarea enantiomerilor amfetaminei, metamfetaminei, MDA, MDMA și MDEA prin GC folosind diferite faze staționare. Separarea derivaților l-TPC a fost descrisă pe coloane GC echivalente DB-1 (metil silicon reticulat) și DB-17 (50% fenil metil silicon). Condițiile GC pentru coloana DB-17 au fost o temperatură inițială a cuptorului la 120-210°C la 30°C/min, apoi la 260°C la 6°C/min și menținută timp de 1 minut. Utilizând coloana DB-1, condițiile au fost de la 130°C la 190°C la 4°C/min, apoi la 250°C la 25°C/min și menținute timp de 2 minute. În ambele cazuri, portul de injecție și temperatura interfeței au fost de 270°C. Ionii monitorizați au fost m/z 237 pentru amfetamină și MDA, m/z 241 pentru amfetamină-D5 și MDA-D5, m/z 251 pentru metamfetamină și MDMA, m/z 255 pentru metamfetamină-D5 și MDMA-D5, m/z 265 pentru MDEA și m/z 270 pentru MDEA-D5. Metoda ar putea fi utilizată pentru a separa și a identifica enantiomerii fiecăruia dintre analiți la concentrații cuprinse între 5 și 10 000 ng/mL în întreaga gamă (0-100%) a fiecărui enantiomer. Toate vârfurile enantiomerilor au fost separate cu ușurință de linia de bază pe coloana DB-1, dar pe coloana DB-17, enantiomerii d ai MDMA și MDEA nu au fost separați. Deși acest lucru ar cauza o problemă cu multe detectoare GC, spectrometrul de masă a reușit cu ușurință să monitorizeze selectiv ionii unici pentru fiecare dintre analiți și să îi distingă unul de celălalt. În plus, este puțin probabil să se găsească atât MDMA, cât și MDEA consumate în mod abuziv în același timp, prin urmare, probabilitatea ca un eșantion să aibă în el ambii compuși ar fi scăzută. În descrierea analizei enantiomerilor MDEA, Paul et al. au indicat o problemă de interferență a ionilor comuni care a împiedicat utilizarea a mai mult de un singur ion pentru acel analit, în ciuda utilizării unui reactiv de derivare și a unor condiții CG diferite.

Alți cercetători au raportat, de asemenea, separarea enantiomerilor folosind derivați chirali de prolil .

Fallon et al. au raportat dispoziția enantiomerică a MDMA și a metaboliților în urma administrării de MDMA (40 mg) la opt voluntari sănătoși, urmată de recoltarea de probe de urină și plasmă. După extracție, drogurile au fost derivatizate cu MTPA și cromatografiate pe o coloană DB-17 la 50°C timp de 2 min până la 250°C la 25°C/min, apoi la 290°C la 2°C/min, utilizând NPD pentru detecție. Probele de plasmă au fost extrase, derivatizate și cromatografiate pe o coloană echivalentă DB-1 (HP ultra 1) la 100°C timp de 3 minute până la 285°C la 15°C/min și menținute timp de 5 minute și analizate prin SM. Ioni la m/z 119, 139, 162, 189, 260 pentru amfetamină, 135, 162, 189, 260 pentru MDA, 135, 162, 189, 260 pentru MDMA au fost utilizați pentru a detecta compușii de interes. Cuantificarea a fost realizată folosind m/z 162 pentru droguri și m/z 148 pentru standardul intern metoxifenamină. Testul a arătat o concordanță strânsă între compoziția enantiomerică reală și cea măsurată la trei concentrații diferite și patru rapoarte diferite.

MTPA a fost utilizat de un număr de alți autori (după cum s-a menționat anterior) pentru analiza amfetaminei și a compușilor înrudiți. Utilizând un DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, SUA) și condițiile GC de: temperatura portului injector 140°C. Temperatura inițială a cuptorului a fost setată la 140°C timp de 0,5 minute, apoi la 215°C la 15°C/min, apoi la 285°C la 35°C/min și menținută timp de 1 minut. Temperatura liniei de transfer a fost menținută la 280°C. Această metodă a fost utilizată pentru separarea enantiomerilor de amfetamină și metamfetamină. Enantiomerii de metamfetamină au fost separați cu 0,07 min la un timp de retenție de >7 min, ceea ce plasează enantiomerii la o diferență de 1% unul față de celălalt, o cerință obișnuită pentru o variație acceptabilă a timpului de retenție în cadrul unei serii analitice. Deoarece ambii enantiomeri se eluează foarte aproape unul de celălalt, este important să se evalueze cu atenție care vârf de enantiomer este evaluat de sistemul de date al instrumentului. Procedura a dat deviații standard relative, la trei concentrații diferite (500, 2000 și 4000 ng/mL) de 0,4-7,2% pentru amfetamină și de la 0,5 la 4,0% pentru metamfetamină. Testul, folosind o regresie ponderată 1/X, a dat un interval liniar de 25-10.000 ng/mL. O procedură similară a fost descrisă pentru analiza amfetaminei derivatizate cu MTPA, a metamfetaminei, a MDA, a MDMA și a MDEA pe o coloană capilară de 5% fenil polisiloxan (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) folosind următoarele condiții GC: Temperatura cuptorului a fost crescută de la 140°C timp de 0,5 min la 215°C la 15°C/min timp de 1,5 min până la 285°C la 35°C/min, unde a fost menținută timp de 1,0 min. Temperaturile injectorului și ale liniei de transfer au fost la 160°C și, respectiv, 260°C. Testul a dat un interval liniar de 25-5 000 ng/mL pentru MDEA și de 25-10 000 ng/mL pentru amfetamină, metamfetamină, MDA, MDMA. Variația la concentrația limită (500 ng/mL) a fost cuprinsă între ±11% pentru toți analiții.

Peters et al. au descris un test GC-MS de ionizare chimică cu ioni negativi pentru determinarea enantiomerilor amfetaminei și ai metamfetaminei în plasmă sau ser. Enantiomerii au fost derivatizați cu clorură de S-heptafluorobutirilproliol și separați cu ajutorul unui GC. Metoda a fost liniară de la 5 la 250 μg/L, cu o eficiență de extracție de 88,9-98,6 % folosind o extracție simplă în fază solidă. Condițiile GC au fost următoarele: coloană de 5% fenil metil siloxan (HP-5MS; 30 m×0,25 mm i.d.); temperatura portului de injecție, 280°C; temperatura coloanei, 100 °C, crescută la 180°C la 30°C/min, la 230°C la 5°C/min și la 310°C la 30°C/min, linia de transfer, 280°C; NICI, metan (2 mL/min); temperatura sursei, 150°C. Ionii monitorizați au fost: m/z 399, 379 și 439 pentru amfetamină-d11 și m/z 388, 368 și 428 pentru amfetamină; (EMV crescut cu 400 V) m/z 407, 387 și 447 pentru metamfetamină-d5 și m/z 402, 382 și 442 pentru metamfetamină. Sensibilitatea crescută oferită de ionizarea chimică cu ioni negativi a permis utilizarea unui eșantion de 0,2 ml. Într-o publicație ulterioară care descrie profilul metabolic al MDMA în urma administrării drogului într-un studiu controlat de către același autor, a fost, de asemenea, descrisă o validare amănunțită a testului. Într-o altă procedură care utilizează NICI, Leis et al. au descris, de asemenea, o metodă de analiză cantitativă a enantiomerilor amfetaminei în plasma umană prin GC/monitorizare chimică cu ionizare de ioni negativi MS. Metoda a fost liniară într-un interval de 0,006-50 ng/mL. În urma unei extrageri lichide simple a 1 ml de plasmă și a derivatizării cu clorură de (S)-heptafluorobutirilproliu, condițiile GC utilizate au fost: coloană capilară de silice topită SGE-BPX5 (15 m×0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injector 280°C, temperatura coloanei a fost de 100°C timp de 1 min, urmată de o creștere de 40°C/min până la 180°C, 5°C/min de la 180-195°C, 40°C/min până la 310°C timp de 2 min, linie de transfer 315°C. Ionizarea chimică a fost realizată cu metan cu un curent de emisie de 300 mA. Ionii monitorizați pentru acest studiu farmacocinetic au fost m/z 368,1 și 373,1 pentru amfetamină și, respectiv, pentru standardul intern.

Analiza MDMA și a regioizomerilor înrudiți a fost descrisă de mai mulți autori, contribuind la asigurarea faptului că acești compuși strâns înrudiți pot fi ușor diferențiați . Combinația dintre caracteristicile spectrale de masă și, în special, comportamentul cromatografic al acestor analiți sunt descrise de ambele grupuri în raport cu importanța lor pentru identificarea corectă a acestor compuși. Optimizarea a arătat că ratele foarte lente ale programului au dat cea mai bună separare pe faze staționare nepolare, dar timpul de funcționare de peste 85 de minute nu era practicabil. Utilizarea coloanelor capilare cu diametru îngust cu aceleași faze a îmbunătățit timpul de analiză la aproximativ o jumătate de oră, datorită puterii de rezolvare sporite a acestora. Optimizarea unei coloane DB-35MS, o coloană cu fază staționară polară, a permis rezoluția a 10 regioizomeri cu catenă laterală și regioizomeri inelari ai MDMA în aproximativ 4,5 min.

.