Test lizatu amebocytów Limulusa (LAL) jest metodą wykrywania i ilościowego oznaczania endotoksyn bakteryjnych, która jest szeroko stosowana w przemyśle farmaceutycznym i biotechnologicznym. Biochemiczna zasada testu oparta jest na reakcji krzepnięcia hemolimfy Limulus polyphemus, powszechnie znanego jako podkowiec atlantycki, w obecności antygenów o powierzchni mikrobiologicznej, takich jak lipopolisacharydy lub endotoksyny bakteryjne.

Firma „Wako Chemicals” należy do firm produkujących odczynniki LAL na poziomie międzynarodowym ze względu na unikalną formułę odczynnika LAL specyficznego dla endotoksyn bakteryjnych bez interferencji beta glukanów w próbkach, dzięki dodatkowi karboksymetylowanego Curdlanu (CMC) koliofilizowanego z LAL. Pod marką PYROSTAR™, ten dystrybutor odczynników badawczych produkuje i sprzedaje odczynniki i akcesoria LAL, które spełniają wszystkie normy, przepisy i standardy jakości ustanowione przez FDA z USA.

Mówimy teraz o różnych odczynnikach i akcesoriach, za pomocą których Wako przyczynia się do badania endotoksyn bakteryjnych:

Po pierwsze, mamy zestaw Limulus PS Simple Test, który pozwala na wykrywanie i oznaczanie ilościowe endotoksyn bez interferencji innych współistniejących substancji z wykorzystaniem adsorbentu powinowactwa do endotoksyn zwanego Pyrosep™. Dzięki tej metodzie możemy mierzyć endotoksyny w próbkach lipofilnych, pod warunkiem, że można je rozpuścić w etanolu, takich jak witaminy rozpuszczalne w tłuszczach, oleje i tłuszcze, albuminy, itp. które normalnie nie mogą być mierzone za pomocą konwencjonalnego testu Limulusa. Co więcej, nie marnuje się odczynnika LAL, ponieważ jest on stosowany indywidualnie w fiolkach prostego testu i może być użyty w dokładnej ilości wymaganej do pomiaru.

Seria PYROSTAR™ ES-F jest unikalnym preparatem zawierającym karboksymetylowany Kurdlan (CMC) koliofilizowany z LAL w celu usunięcia interferencji z β-glukanami. Bufor ES opracowany przez Wako zawiera wysokie stężenie CMC, przekształcając się w specyficzny dla endotoksyn odczynnik LAL. Odczynnik ten jest przeznaczony do stosowania zarówno w jakościowym wykrywaniu endotoksyn metodą żel-krzep, jak i do ich ilościowego wykrywania kinetycznymi metodami turbidymetrycznymi (KTA). Do pomiaru szybkości zmiany zmętnienia stosowany jest przyrząd fotometryczny o nazwie Toxinometer®, opracowany przez firmę Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Zestawy PYROSTAR™ ES-F są dostępne z i bez Standardowej Kontroli Endotoksyny (SCE): liofilizowany odczynnik rafinowany z E.coli i używany do potwierdzenia czułości odczynnika LAL, walidacji metod badania produktu i przygotowania kontroli inhibicji.

Aby wesprzeć te odczynniki, Wako opracowuje również Roztwór do Ekstrakcji Endotoksyn zdolny do ekstrakcji endotoksyn z powierzchni, z których nie można ich wyekstrahować za pomocą wody lub soli. Jego użycie jest zalecane w próbkach endotoksyn znajdujących się na sprzęcie i urządzeniach, które mogą mieć kontakt z płynami zawierającymi krew lub białka.

Toxinometer® ET-6000 jest skomputeryzowanym czytnikiem do inkubacji kinetycznej, który może zawierać 3 metody testowe: gel-clot, KTA i KCA (kinetyczny test chromogenny). Urządzenie to pozwala na uzyskanie wyników gel-clot i KTA z tej samej próbki. Jednocześnie mierzy do 16 próbek z ryzykiem kontaminacji znacznie mniejszym niż mikropłytki i pozwala na archiwizację krzywych standardowych. Toximaster® QC7 to oprogramowanie, które zapewnia wszystkie funkcje przetwarzania danych i przygotowywania raportów dla testu LAL z użyciem Toxinometer® ET-6000.

Więcej, wśród akcesoriów z katalogów LAL firmy Wako, widzimy również probówki testowe z pokrywkami aluminiowymi i bez. Probówki te są produkowane bez endotoksyn, wykonane ze szkła borokrzemowego i przeznaczone do metody żel-krzep. Grubość szkła może być specjalnie skalibrowana do Toxinometru w celu zapewnienia stabilnego natężenia światła i transmisji.

Innym odczynnikiem LAL sprzedawanym przez Wako jest zestaw KY Color Limulus. Odczynnik ten został zaprojektowany dla metody KCA i może być stosowany zarówno w czytniku kinetycznym, jak i w czytniku mikropłytek. Zawiera on zestaw wielotestowy i prosty zestaw testowy, każdy przeznaczony do analizy kolorymetrycznej opartej na czasie, wykorzystujący syntetyczny substrat, który generuje żółty kolor i który może specyficznie wykrywać endotoksynę z wysoką czułością.

Bibliografia:

1) Iwanaga, S. Biochemical principle of Limulus test for detecting bacterial endotoxins. Proceedings of the Japan Academy, Series B, 83(4), 110-119. (2007).

2) Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test of Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products and Medical Devices. U.S. Dept. of Health & Human Services, FDA, December (1987).

3) Katsuhito Inoue, Aya Takaoka, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 110 (1992), 6th Annual Meeting of the Japanese Society for Alternatives to Animal Experiments.

4) Katsuhito Inoue, Tomoaki Harada, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 44 (1994), 21st Annual Meeting of the Society for Antibacterial and Antifungal Agents.

5) Tsuchiya, M.; Oishi, H.; Takaoka, A.; Fusamoto, M. y Matsuura, S. Discrimination between endotoxin and (1-3) beta-D-glucan using turbidimetric kinetic assay with Limulus amebocyte lysate. Chem Pahrm Bull (Tokyo), 38(9). 2523. (1990).

LAL PRODUCT LINE

LAL Reagent Kit	LAL Accessories

.