Projekt badania

W tym dwuramiennym, podwójnie zaślepionym, randomizowanym badaniu zrekrutujemy 60 ciężarnych kobiet w wieku 19-42 lat mieszkających w Vancouver, BC, Kanada. Uczestniczki będą randomizowane do codziennego uzupełniania przez 16 tygodni albo 0,6 mg/dzień kwasu foliowego lub równej dawki (0,625 mg/dzień) kwasu (6S)-5-metylotetrahydrofoliowego (ryc. 2). Dawka 0,6 mg będzie odpowiadać poziomom znalezionym w wiodących komercyjnych markach witamin prenatalnych (Materna®), zwiększając w ten sposób możliwość generalizacji naszych wyników. 16-tygodniowa interwencja została oparta na szacowanym okresie półtrwania folianów w RBC i ma na celu umożliwienie pomiaru długoterminowego statusu folianów w RBC (w ciągu ostatnich 12-16 tygodni). Wszystkie uczestniczki otrzymają również prenatalną multiwitaminę niezawierającą folianów, aby zapewnić adekwatność innych składników odżywczych (np. żelaza) podczas ciąży. Próbki krwi żylnej na czczo zostaną pobrane na początku i na końcu badania, aby zmierzyć podstawowe wskaźniki wyników, w tym folian w surowicy, folian RBC i UMFA w osoczu; eksploracyjne wskaźniki będą obejmować S-adenozylometioninę w osoczu, S-adenozyl-homocysteinę, całkowitą homocysteinę, całkowitą cysteinę, metioninę, witaminę B12, pirydoksal-5-fosforan, wolną cholinę i betainę. Określone zostanie również genotypowanie wariantów MTHFR (677 C > T, rs1801133, i 1298 A > C, rs1801131) i DHFR (rs1643649 i rs70991108) oraz pełna morfologia krwi. Kobiety będą miały możliwość kontynuowania badania w fazie poporodowej (eksploracyjnej), gdzie podczas wizyty końcowej otrzymają więcej suplementów, które będą przyjmować do około 1 tygodnia po porodzie. W dniach 5-7 po porodzie kobiety dostarczą małą (3 ml) próbkę mleka kobiecego i próbkę krwi żylnej bez okresu spoczynku. Wyniki oceniane w mleku matki będą obejmować formy folianów (UMFA, THF, 5-metylo-THF, 5-formylo-THF i 5,10-metenylo-THF) oraz FBP w mleku. Wyniki oceniane w poporodowej próbce krwi będą obejmować foliany w krwinkach czerwonych i UMFA w osoczu. Protokół badania został opracowany zgodnie z zaleceniami Standard Protocol Items 2013: Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) (ryc. 3) . Zobacz plik dodatkowy 1 (lista kontrolna SPIRIT), aby uzyskać więcej szczegółów.

Schemat przepływu uczestników

Standard Protocol Items: Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) schedule of enrollment, interventions and assessments

Pierwszorzędowym celem tego badania pilotażowego jest uzyskanie szacunkowych danych dotyczących zmiany stężenia folianów w surowicy, folianów w RBC i UMFA po suplementacji kwasem (6S)-5-metylotetrahydrofoliowym i kwasem foliowym przez 16 tygodni ciąży, aby opracować projekt odpowiednio silnego badania ostatecznego. Celem drugorzędnym jest uzyskanie wskaźników rekrutacji i uczestnictwa, aby pomóc w projektowaniu i wykonalności ostatecznego badania. Eksploracyjne cele fazy poporodowej to ilościowe określenie proporcji całkowitego folianu w mleku matki jako kwasu foliowego w każdej grupie, ocena korelacji między UMFA w osoczu matki po porodzie i kwasem foliowym w mleku matki oraz ocena stężenia folianu w krwinkach czerwonych po porodzie w każdej grupie.

Uczestnicy, rekrutacja i świadoma zgoda

Kryteria włączenia: (1) kobieta w ciąży (ciąża pojedyncza); (2) mieszkająca w większym obszarze Vancouver; (3) ≤ 21 tygodni ciąży w momencie wyrażania zgody; (4) 19-42 lat; oraz (5) zdolna do udzielenia świadomej zgody.

Kryteria wykluczenia: (1) wcześniej istniejące warunki medyczne, o których wiadomo, że mogą wpływać na status folianów u matki (malabsorpcyjne i zapalne choroby jelit, aktywna celiakia, operacja ominięcia żołądka, zanikowe zapalenie żołądka, padaczka, zaawansowana choroba wątroby, dializa nerek, cukrzyca typu 1 lub 2, cecha sierpowata / niedokrwistość) ; (2) czynniki związane ze stylem życia, o których wiadomo, że mogą wpływać na poziom folianów u matki (palenie tytoniu, spożywanie alkoholu, zażywanie narkotyków); (3) średnie lub wysokie ryzyko rozwoju ciąży z NTD (dotyczy kobiet lub ich partnerów płci męskiej): osobista lub rodzinna historia (rodzice lub rodzeństwo) innych wrażliwych na foliany wad wrodzonych, osobista historia NTD lub poprzednia ciąża dotknięta NTD) ; (4) leki, o których wiadomo, że zaburzają metabolizm witamin z grupy B (chloramfenikol, metotreksat, metformina, sulfasalazyna, fenobarbital, fenytoina, prymidon, triamteren, barbiturany); (5) wskaźnik masy ciała (BMI) przed ciążą ≥ 30 kg/m2; lub (6) alergia na którykolwiek składnik badanego suplementu.

Wielkość próby

Wielkość próby została obliczona na podstawie głównego celu, jakim jest oszacowanie rozkładu (średnia ± odchylenie standardowe) zmian w głównych wynikach (stężenie folianów w surowicy, stężenie folianów w RBC i UMFA) po 16 tygodniach suplementacji. Aby to osiągnąć, będziemy potrzebować 50 kobiet (25 w każdej grupie); próba o wielkości co najmniej n = 50 jest ogólnie uznawana za odpowiednią dla badań pilotażowych w badaniach klinicznych. Inflacja 20% zostanie dodana w celu uwzględnienia uczestników, którzy zrezygnowali lub stracili udział w badaniu; w ten sposób łącznie 60 kobiet (30 w każdej grupie) zostanie zrekrutowanych.

Rekrutacja

Plakaty będą wyświetlane w BC Women’s Hospital, w klinikach medycznych i prenatalnych oraz w placówkach detalicznych dla kobiet w ciąży (np. klasy prenatalne, studia fitness, sklepy z odzieżą ciążową) w całym Vancouver, BC, Kanada. Szczegóły badania będą udostępniane personelowi i pracownikom służby zdrowia, w tym lekarzom, położnym, pielęgniarkom i innym osobom, w zależności od potrzeb. Reklama w mediach społecznościowych (Facebook i Instagram) zostanie wykorzystana i skierowana do kobiet w ciąży w wieku 19-42 lat w większym obszarze Vancouver, BC.

Uzyskanie świadomej zgody i potwierdzenie kwalifikowalności

Kobiety zainteresowane udziałem w badaniu będą kontaktować się bezpośrednio z koordynatorem badania (KMC). W tym czasie zostaną opisane szczegóły badania, kwalifikacja i świadoma zgoda. Kwalifikujące się uczestniczki, które chciałyby zostać włączone do badania, otrzymają identyfikator badania i zostanie zaplanowana ich wizyta wyjściowa. Uczestniczki zostaną poinstruowane, aby kontynuowały dotychczasową prenatalną suplementację multiwitaminą/folianami do czasu wizyty wyjściowej. Opcjonalna faza poporodowa badania zostanie opisana w formularzu świadomej zgody; jednak uczestniczki, które zdecydują się kontynuować badanie po upływie 16 tygodni, otrzymają do podpisania oddzielny formularz zgody.

Wizyty badawcze

Wizyty badawcze będą odbywać się w Vancouver, BC, Kanada w University of British Columbia, Food, Nutrition and Health Building oraz w Clinical Research Evaluation Unit w BC Children and Women’s Hospital. Linia bazowa (8-21 tydzień ciąży): Zarówno uczestnik, jak i koordynator badania (KMC) podpiszą formularz świadomej zgody; kopia zostanie zeskanowana i przesłana uczestnikowi pocztą elektroniczną po wizycie w ramach badania. Uczestniczki wypełnią kwestionariusz wyjściowy w celu zebrania danych demograficznych oraz wywiadu medycznego i żywieniowego. Do obliczenia wartości DFE zostanie użyty zatwierdzony kwestionariusz częstotliwości jedzenia. Waga i wzrost zostaną zmierzone przy użyciu wagi elektronicznej i stadiometru i zarejestrowane z dokładnością odpowiednio do 0,1 kg i 0,10 m. Zostanie pobrana 12-ml próbka krwi żylnej na czczo z 3 godzin. Uczestnicy otrzymają badane suplementy (kwas foliowy lub kwas (6S)-5-metylotetrahydrofoliowy) i otrzymają dzienniczek suplementów, w którym będą zapisywać dzienne spożycie. Punkt środkowy: po 8 tygodniach skontaktujemy się ze wszystkimi kobietami, aby sprawdzić, czy przestrzegają one zaleceń, odpowiedzieć na wszelkie pytania i wątpliwości oraz zaplanować wizytę końcową. Punkt końcowy (24-37 tydzień ciąży): zostanie pobrana 12 ml próbka krwi żylnej na czczo z 3 godzin, waga zostanie zmierzona w sposób opisany powyżej, a uczestniczki wypełnią kwestionariusz końcowy w celu określenia wszelkich zmian w stanie zdrowia lub przyjmowaniu leków od czasu linii podstawowej. Uczestniczki zwrócą swój dzienniczek suplementacyjny, a wszystkie pozostałe kapsułki zostaną policzone. Połóg: podczas wizyty końcowej uczestniczki, które planują karmić piersią i mają pracujący domowy zamrażalnik, mogą kontynuować badanie w fazie połogu. Po uzyskaniu zgody na podstawie drugiego formularza świadomej zgody, otrzymają one suplementy, które będą przyjmować do około 1 tygodnia po porodzie oraz nowy dzienniczek suplementów. Uczestniczki zostaną przeszkolone w zakresie pobierania małej (3 ml) próbki mleka kobiecego w domu w dniach 5-7 po porodzie i otrzymają wszystkie potrzebne materiały (opisane bardziej szczegółowo w części „Pobieranie i przetwarzanie mleka kobiecego” poniżej). Uczestniczki będą przechowywać próbkę mleka matki w zamrażarce i powiadomią koordynatora badań, kiedy będzie gotowa do odbioru. Odbiór nastąpi w ciągu 4 dni od powiadomienia i w tym czasie zostanie pobrana 12-ml próbka krwi żylnej. Kobiety zostaną poinstruowane, aby przyjmowały suplement folianowy 2 godziny przed pobraniem zarówno próbek mleka matki, jak i krwi w celu standaryzacji szczytu w osoczu UMFA (i potencjalnie wchłaniania UMFA do mleka matki; jednak czas tego procesu nie jest dobrze opisany).

Suplementy do badań

Kwas foliowy i kwas (6S)-5-metylotetrahydrofoliowy będą dostarczane oddzielnie od prenatalnych multiwitamin. Decyzja ta została podjęta, ponieważ niektóre kobiety zgłaszają nietolerancję podczas spożywania prenatalnych multiwitamin; jest to zwykle spowodowane wysoką zawartością żelaza i ustępuje po pierwszym trymestrze. Jeśli wystąpi tymczasowa nietolerancja, uczestnicy mogą pominąć lub przyjąć połowę dawki multiwitaminy, kontynuując jednocześnie suplementację pełną dawką folianów. Masowe składniki dla kwasu foliowego i prenatalnych multiwitamin zostały dostarczone przez Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada). Masowe (6S)-5-metylotetrahydrofoliowy kwas (Metafolin®) został dostarczony przez Merck & Cie (Schaffhausen, Szwajcaria). Wszystkie składniki masowe zostały zmieszane w roślinno-żelowe kapsułki w Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada). Kapsułki z kwasem foliowym i kwasem (6S)-5-metylotetrahydrofoliowym mają identyczny wygląd, aby umożliwić podwójnie ślepą próbę. Prenatalna multiwitamina zawiera ten sam skład mikroskładników odżywczych, co WN Pharmaceuticals Ltd.® Prenatal (NPN 80025456), z wyjątkiem kwasu foliowego, który został usunięty. Ogólne podsumowanie jakości zostało wykonane dla wszystkich badanych suplementów przez Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada) i zweryfikowane przez Health Canada, z potwierdzeniem dawek kwasu foliowego i kwasu (6S)-5-metylotetrahydrofoliowego za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Zawiadomienie o autoryzacji wniosku o przeprowadzenie badań klinicznych (Submission No. 244456) zostało dostarczone przez dyrekcję naturalnych i dostępnych bez recepty produktów zdrowotnych Health Canada w dniu 26 lipca 2019 r.

Podwójnie ślepa próba, randomizacja i dostarczanie opakowań suplementów

Niezależny asystent badawczy z Natural Factors (Coquitlam, BC, Kanada) przypisze kody ślepej próby (A lub B) do suplementów kwasu foliowego i kwasu (6S)-5-metylotetrahydrofoliowego. Butelki suplementów folianowych będą oznaczone literami „A” lub „B” i będą zawierały informację, że „kapsułki zawierają albo kwas foliowy, albo foliany”. Zarówno uczestnicy, jak i główny zespół badawczy będą zaślepieni na przydziały suplementów, które zostaną odkodowane dopiero po zakończeniu ostatecznych analiz statystycznych. Sekwencja randomizacji zostanie wygenerowana komputerowo przez niezależnego statystyka, przy użyciu bloków po cztery, z których każdy zawiera dwóch uczestników na grupę suplementów. Główny zespół badawczy będzie zaślepiony na sekwencję randomizacji. Podczas wizyty wyjściowej każdego uczestnika koordynator badania (KMC) odślepi przydział (A lub B) dla danego identyfikatora badania tylko w celu dostarczenia przydzielonych suplementów badania. Na wizycie wyjściowej uczestniczki otrzymają pakiet suplementów zawierający wszystkie kapsułki na 16-tygodniowy okres interwencji; jeśli uczestniczki zdecydują się kontynuować badanie w fazie poporodowej, na wizycie końcowej otrzymają więcej suplementów, które będą przyjmować do ~1 tygodnia po porodzie.

Leki towarzyszące

Po włączeniu do badania nie będzie ograniczeń w przyjmowaniu leków przez cały okres interwencji; jednakże wszystkie leki muszą być zgłaszane. Jedynym wyjątkiem będą suplementy diety zawierające kwas foliowy/foliowy, które nie będą dozwolone przez cały okres interwencji.

Strategie zwiększania adherencji

Kobiety w ciąży mają tendencję do bycia wysoce zmotywowanymi i są ogólnie zainteresowane udziałem w klinicznych próbach badawczych. Jak wynika z badania Public Health Agency of Canada, 94% kobiet w Kolumbii Brytyjskiej uzupełnia prenatalne multiwitaminy podczas ciąży. W związku z tym, uczestnicy będą prawdopodobnie przyzwyczajeni do codziennej suplementacji w momencie zapisu do badania. Koordynator badania (KMC) skontaktuje się z każdym uczestnikiem w połowie badania (8 tygodni po wizycie wyjściowej), aby odpowiedzieć na wszelkie pytania lub wątpliwości. Dodatkowo, opakowanie suplementów pozwoli na zorganizowane przechowywanie suplementów w domu, a dzienniczek suplementów będzie służył jako codzienne przypomnienie, aby wzmocnić przestrzeganie zaleceń przez 16 tygodni. Z tych powodów spodziewamy się wysokiego poziomu przestrzegania protokołu badania (> 90%).

Pobieranie i przetwarzanie próbek krwi

Próbki krwi żylnej (łącznie 12 mL) zostaną pobrane do 6-mL probówki z kwasem etylenodiaminotetraoctowym

(EDTA), 2-mL probówki z EDTA i 4-mL probówki z surowicą (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) podczas wizyty podstawowej, końcowej i poporodowej (jeśli dotyczy). Pobieranie krwi na linii podstawowej i końcowej nastąpi po 3-godzinnym poście; te ramy czasowe są wystarczające do zmniejszenia zakłócającego wpływu niedawnego spożycia folianów na stężenie w surowicy. Próbka krwi po porodzie (~ 1 tydzień po porodzie) nie będzie na czczo, ponieważ nie wpłynie to na stężenie folianów w RBC i zmniejszy obciążenie uczestników. Po pobraniu, probówki będą osłonięte od światła, delikatnie odwrócone zgodnie z zaleceniami producenta, umieszczone w chłodziarce i przewiezione do laboratorium w celu natychmiastowego przetworzenia (w ciągu 2 h od pobrania).

W celu przygotowania hemolizatu krwi pełnej, krew pełna (0,3 mL) zostanie usunięta z 6-mL probówki EDTA i rozcieńczona 1/11 przez dodanie 3,0 mL 1% roztworu kwasu askorbinowego, a następnie inkubowana w temperaturze 37 °C przez 30 min. Następnie 6-mL probówka z EDTA będzie odwirowywana przy 3000 rpm przez 15 min w 4 °C. Osocze zostanie zebrane i (tylko dla próbek linii podstawowej i końcowej) pozostała zawartość 6-ml probówki EDTA zostanie przetworzona do izolacji komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMCs) za pomocą protokołu izolacji SepMate PBMC (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Kanada). Probówka o pojemności 2 ml z EDTA zostanie użyta do pełnej morfologii krwi. Probówka z surowicą o pojemności 4 ml zostanie pozostawiona w temperaturze pokojowej na około 30 minut (do momentu zakrzepnięcia), a następnie odwirowana przy 3000 obr/min przez 15 minut w temperaturze 4°C; surowica zostanie zebrana. Wszystkie podwielokrotności będą przechowywane w temperaturze – 80 °C do czasu dalszej analizy.

Zbieranie i przetwarzanie mleka matki

Kobiety zostaną poinstruowane, aby zebrać mleko matki w dniach 5-7 po porodzie między 13:00 a 14:50 (ponieważ średnie stężenie folianów w tym czasie wydaje się być reprezentatywne dla średnich stężeń folianów w okresie 24 godzin), 2-3 godziny po ostatnim pełnym odciągnięciu pokarmu. Uczestniczki będą całkowicie odciągać mleko (ręcznie lub za pomocą pompy elektrycznej) z prawej piersi. Po odciągnięciu pokarmu kobiety zostaną poinstruowane, aby delikatnie zawirować mleko w celu jego wymieszania, a następnie, używając sterylnej pipety sokołowej, przeniosą 0,5 mL do dwóch bursztynowych fiolek kriogenicznych (każda zawiera 0,005 g kwasu askorbinowego dla 1% rozcieńczenia) i 1 mL do dwóch bursztynowych fiolek kriogenicznych. Wszystkie fiolki będą wyraźnie oznaczone na poziomie 0,5 i 1 ml. Kobiety umieszczą wszystkie fiolki w pudełku do zamrażania, które będzie przechowywane w zamrażarce przez okres do 4 dni. Próbki zostaną pobrane w stanie zamrożonym i przeniesione do laboratorium w celu przechowywania w temperaturze – 80 °C do czasu dalszej analizy.

Analizy laboratoryjne

Foliany w surowicy (nmol/L) i foliany w krwinkach czerwonych (nmol/L) będą analizowane metodą mikrobiologiczną, zgodnie z ogólnymi zaleceniami, przy użyciu metody płytek mikrotitracyjnych opisanej przez Molloy et.al . Folian RBC (nmol/L) będzie obliczany według następującego wzoru :

Biomarkery osocza, w tym UMFA (nmol/L), S-adenozylometionina (μmol/L), S-adenozyl homocysteina (μmol/L), homocysteina całkowita (μmol/L), cysteina całkowita (μmol/L), metionina (μmol/L), wolna cholina (μmol/L) i betaina (μmol/L) będą analizowane przy użyciu spektrometrii masowej chromatografii cieczowej. Witamina B12 (pmol/L) będzie analizowana przy użyciu immunoanalizatora. Pyridoxal-5-phosphate (nmol/L) będzie analizowany przy użyciu chromatografii cieczowej-tandemowej spektrometrii mas. Warianty genów będą genotypowane przy użyciu testów genotypowania SNP TaqMan . Pełna morfologia krwi zostanie wykonana przy użyciu automatycznego analizatora hematologicznego (Sysmex XNL-550). Formy folianów w mleku matki (w tym UMFA, THF, 5-metylo-THF, 5-formylo-THF i 5,10-metenylo-THF) zostaną określone ilościowo za pomocą chromatografii cieczowej-tandemowej spektrometrii masowej; całkowity folian będzie stanowił sumę tych form. Stężenia FBP w mleku matki będą mierzone przy użyciu procedury konkurencyjnego wiązania radioaktywnego (jak opisano przez Selhub et al.) .

Summary of data to be collected

Demographic, medical and nutrition data via structured questionnaires

Baseline data collection will include age, ethnicity, parity, education, occupation, household income, medical and medication history, reported pre-pre-pregnancy weight, general diet (including vegan, vegetarian, ketogenic, gluten-free food intake and any foods/food groups avoided for any reason) and supplement use. Końcowe zbieranie danych będzie obejmowało wszelkie zmiany w ogólnym stanie zdrowia lub stosowaniu leków od czasu wizyty wyjściowej.

Antropometria

Przedciążowe BMI zostanie obliczone przy użyciu samodzielnie zgłoszonej wagi sprzed ciąży i zmierzonego wzrostu. Pomiary uczestniczek będą wykonane na linii podstawowej (waga i wzrost) i końcowej (tylko waga) w celu obliczenia przyrostu masy ciała w ciąży przez cały okres interwencji i całkowitego przyrostu masy ciała w czasie ciąży (przy użyciu samodzielnie zgłoszonej wagi sprzed ciąży i zmierzonej wagi końcowej).

Ocena diety

Całkowite DFE (μg/dzień) z folianów spożywczych i uzupełniającego kwasu foliowego zostaną obliczone przy użyciu Block Folic Acid/Dietary Folate Equivalents Screener (NutritionQuest, Berkeley, CA, USA), zatwierdzonego kwestionariusza częstotliwości jedzenia.

Dane poporodowe

Totalne tygodnie suplementacji, tygodnie ciąży przy porodzie, zgodność z protokołem zbierania mleka matki i czas suplementacji folianów przed zebraniem próbek mleka matki i krwi poporodowej zostaną zarejestrowane.

Kryteria wycofania

Kryteria wycofania obejmują spontaniczne lub planowane przerwanie ciąży, stosowanie dodatkowych suplementów diety zawierających kwas foliowy/foliowy oraz po wystąpieniu niepożądanego/poważnego niepożądanego zdarzenia związanego z suplementami/interwencją próbną (zgodnie z ustaleniami wykwalifikowanego badacza (CM)). Uczestnicy mogą również wycofać się w dowolnym momencie i nie będą zbierane żadne dalsze informacje. Niezależnie od powodu wycofania się, wszystkie wcześniej zebrane dane zostaną zachowane do analizy. Uczestniczki, które urodzą dziecko przed wizytą końcową, będą miały możliwość kontynuowania badania w fazie poporodowej, pod warunkiem, że będą kontynuować codzienną suplementację badanymi suplementami.

Obsługa danych i prywatność

Wszystkie dane i próbki biologiczne będą identyfikowane przy użyciu identyfikatora badania każdego uczestnika. Dane z osobistymi identyfikatorami będą przechowywane na zaszyfrowanym, chronionym hasłem komputerze w bezpiecznej przestrzeni serwerowej w BC Children’s Hospital Research Institute. Dane z usuniętymi identyfikatorami osobowymi zostaną wyczyszczone i podwójnie wprowadzone przez koordynatora badania (KMC) i niezależnego asystenta badawczego do REDCap (Research Electronic Data Capture) obsługiwanego przez BC Children’s Hospital Research Institute. KMC, JAH i CDK będą mieli dostęp do ostatecznego zestawu danych. Dokumenty papierowe będą przechowywane w zamkniętej szafce na dokumenty, a próbki biologiczne w zamkniętej zamrażarce znajdującej się w laboratorium głównego badacza (CDK) na University of British Columbia. Uczestnikom można powiedzieć o ich przydziale suplementu folianowego i wynikach folianów we krwi/mleku (jeśli dotyczy) (w tym DFE, foliany w surowicy i RBC na linii podstawowej, końcowej i poporodowej oraz całkowite stężenia folianów w mleku matki) po zakończeniu ostatecznych analiz statystycznych.

Dane i analiza statystyczna

Dla danych wyjściowych uczestników zastosowane zostaną statystyki opisowe. Zmienne ciągłe będą podawane jako średnia ± odchylenie standardowe (lub mediana i zakres międzykwartylowy, jeśli nie są dystrybuowane normalnie), a zmienne kategoryczne jako liczby bezwzględne na grupę i procent. Liczba kapsułek zostanie wykorzystana do obliczenia stopnia przestrzegania zaleceń przez uczestników, a dzienniczek suplementów do zapewnienia opisowego wglądu w bariery w przestrzeganiu zaleceń. Dane zostaną ocenione pod kątem normalności, a jeśli nie będą miały rozkładu normalnego, rozważone zostanie ich przekształcenie lub zastosowanie równoważnych testów nieparametrycznych. Analizy statystyczne będą wykonywane przy użyciu programu Stata (StataCorp, College Station, TX, USA). Wszystkie analizy będą początkowo zakończone na zasadzie intention-to-treat zgodnie z początkowym przydziałem do grupy na linii podstawowej i bez imputacji brakujących danych. Wtórne analizy per-protokół zostaną przeprowadzone z uwzględnieniem osób, które w pełni ukończyły badanie i postępowały zgodnie z protokołem badania. W analizach wrażliwości zastosowana zostanie imputacja wielokrotna w celu skorygowania brakujących danych.

Analizy pierwszorzędowe

Obliczymy średnią ± odchylenie standardowe dla pierwszorzędowych wyników (stężenie folianów w surowicy, stężenie folianów w RBC i stężenie UMFA w osoczu) w każdej grupie na poziomie wyjściowym i końcowym, jak również średnią ± odchylenie standardowe zmiany w tych wynikach u kobiet w każdej grupie. Te szacunki zostaną wykorzystane do obliczenia wielkości próby w badaniu ostatecznym.

Analizy wtórne

Eksploracyjne analizy wyników pierwotnych zostaną przeprowadzone przy użyciu modelu wielokrotnej regresji liniowej w celu zbadania, czy zmiana od linii podstawowej do linii końcowej różniła się w zależności od statusu leczenia, dostosowując się do wartości linii podstawowej i zmiennych objaśniających (DFE, biomarkery eksploracyjne, tygodnie ciąży przy rozpoczęciu suplementacji). Zostanie również obliczony odsetek kobiet z UMFA ≥ 0,2 nmol / L (uważane za wykrywalne stężenie) na linii podstawowej i końcowej w każdej grupie. Aby uzyskać informacje na temat naszego celu drugorzędowego, ogólny wskaźnik uczestnictwa w badaniu zostanie oszacowany poprzez podzielenie całkowitej liczby kobiet włączonych do badania przez całkowitą liczbę kobiet, które były zainteresowane uczestnictwem. Tygodniowy wskaźnik rekrutacji zostanie oszacowany poprzez podzielenie całkowitej liczby kobiet zapisanych do badania przez całkowitą liczbę tygodni, które zajęła im rekrutacja. Wskaźnik utrzymania uczestnika zostanie oszacowany poprzez podzielenie liczby kobiet, które ukończyły cały proces przez całkowitą liczbę kobiet, które się zarejestrowały. Dla każdej strategii rekrutacji (włączając plakaty, media społecznościowe, word of mouth), całkowity zasięg (tylko media społecznościowe), zapytania, zapisy i koszt będą oceniane. Szanse na zapisanie się do badania po zapytaniu dla każdej strategii będą oceniane za pomocą ilorazu szans. Jeśli dostępne, powody nie zapisywania się będą rejestrowane.

Analizy poporodowe

Obliczymy średnią ± odchylenie standardowe dla proporcji kwasu foliowego w mleku matki (dzieląc stężenie kwasu foliowego w mleku matki przez sumę wszystkich form folianów w mleku matki) oraz dla matczynego poporodowego folianu RBC. Regresja liniowa zostanie wykorzystana do oceny związku między stężeniem kwasu foliowego w mleku matki a stężeniem kwasu foliowego w osoczu krwi matki po porodzie. Wyniki poporodowe będą dalej analizowane przy użyciu wielokrotnej regresji liniowej, dostosowując się do wartości końcowych i zmiennych objaśniających (DFE, całkowita liczba tygodni suplementacji, przestrzeganie protokołu zbierania mleka matki).

Bezpieczeństwo

Kwas foliowy jest dostarczany w dawce, która spełnia kanadyjskie zalecenia dla kobiet w ciąży (0,4-1,0 mg/dobę); dlatego jest uważany za niskie ryzyko. Sól wapniowa kwasu (6S)-5-metylotetrahydrofoliowego jest uznawana za bezpieczną i jest zawarta w kanadyjskich prenatalnych preparatach wielowitaminowych bez ustalonego tolerowanego górnego limitu (obecnie nie jest znane ryzyko szkodliwości). Randomizacja odbędzie się pomiędzy 8 a 21 tygodniem ciąży (po zamknięciu cewy nerwowej). Ze względu na niskie ryzyko tego badania pilotażowego, nie uznano za konieczne powołanie komitetu monitorującego dane. Wszystkie wątpliwości dotyczące bezpieczeństwa oraz, jeśli to konieczne, decyzja o zakończeniu badania, zostaną omówione przez głównych badaczy (CDK i JAH) oraz wykwalifikowanego badacza (CM) i zgłoszone do Rady Etyki Badań oraz Health Canada. Odślepianie kodów interwencji może być podjęte w każdej chwili, jeśli zostanie to uznane za konieczne do monitorowania bezpieczeństwa uczestników.

.