ライセート試験は、細菌性エンドトキシンの検出・定量法として医薬・バイオ産業で広く使われている手法で、日本では1994年から実施されています。 この試験の生化学的原理は、リポポリサッカライドや細菌性エンドトキシンなどの微生物表面を持つ抗原の存在下で、一般に大西洋カブトガニとして知られているリムルスポリフェマスの血リンパの凝固反応に基づいている。

「和光ケミカルズ」は、LALでコリオフィル化したカルボキシメチル化カルドラン（CMC）の添加により、試料中のβグルカンの干渉を受けない細菌エンドトキシンに特異的なLAL試薬という独自の処方で、国際レベルの試薬製造を行う企業の1つである。 研究用試薬の販売会社である当社は、PYROSTAR™ブランドのもと、米国FDAが定めるすべての規範、規制、品質基準に準拠したLAL試薬および付属品を製造、販売しています。

そこで、細菌性エンドトキシンの研究に貢献する、さまざまな試薬やアクセサリーについてお話します。

まず、Limulus PS Simple Test Kitは、Pyrosep™というエンドトキシンの親和性吸着剤を使って、他の共存物質の干渉なしにエンドトキシンを検出、定量することができるものです。 本法では、エタノールに溶解できる親油性試料であれば、従来のリムルス試験で通常測定できない脂溶性ビタミン、油脂、アルブミンなどのエンドトキシンを測定することができます。 また、LAL試薬は簡易検査用バイアルに個別に塗布され、測定に必要な量を正確に使用できるため、無駄がありません。

PYROSTAR™ES-Fシリーズは、β-グルカンとの干渉を除去する目的でLALでコリオフィル化したカルボキシメチル化カルドラン（CMC）を含む独自の製剤で、LAL試薬と同じような効果が得られます。 和光が開発したES-バッファーには高濃度のCMCが含まれており、エンドトキシン特異的なLAL試薬に変化しています。 この試薬は、ゲルクロット法によるエンドトキシンの定性分析およびKTA（Kinetic Turbidimetric Method）による定量分析に使用できるように設計されています。 濁度の変化速度の測定には、和光純薬工業株式会社が開発した光度計「トキシノメーター®」が使用されています。 PYROSTAR™ ES-Fは、大腸菌から精製した凍結乾燥試薬である標準コントロールエンドトキシン（SCE）付きとなしの2種類があり、LAL試薬の感度確認、製品試験法の検証、阻害コントロールの調製に使用されています

また、これらの試薬に合わせて、水や塩では抽出できない表面のエンドトキシンを抽出できるエンドトキシン抽出液の開発にも着手しています。

トキシノメーター® ET-6000は、ゲルクロット、KTA、KCA（kinetic chromogenic test）の3つの試験法を取り入れることができるコンピューター制御のキネティックインキュベーションリーダーです。 この装置により、同一試料からゲル-クロットとKTAの結果を得ることができます。 マイクロプレートよりもはるかに低いコンタミネーションリスクで最大16検体を同時に測定し、標準曲線を保存することができます。 Toximaster® QC7は、Toxinometer® ET-6000を用いたLAL試験のデータ処理とレポート作成のためのすべての機能を提供するソフトウェアです。

さらに、和光のLALカタログの付属品の中には、アルミニウムの蓋付きと蓋なしの試験管も見受けられます。 これらの試験管はエンドトキシンを含まない、ホウケイ酸ガラス製で、ゲル-クロット法用に設計されています。

和光が販売しているもう一つのLAL試薬は、KYカラーリムルスキットです。 この試薬はKCA法用に設計されており、キネティックリーダーとマイクロプレートリーダーの両方で使用することができる。 このキットには、マルチテストキットと簡易テストキットがあり、それぞれ黄色に発色する合成基質を用いて、時間による比色分析を行うように設計されており、エンドトキシンを高感度で特異的に検出できる。

文献：

1) 岩永正二：細菌エンドトキシンを検出するリムルステストの生化学原理. 日本学士院紀要Bシリーズ, 83(4), 110-119. (2007).

2) ヒトおよび動物の非経口医薬品，生物学的製剤および医療機器のエンドプロダクト・エンドトキシン試験としてのリムルス・アメボサイト・ライセート・テストのバリデーションに関するガイドライン. U.S. Dept. of Health & Human Services, FDA, December (1987).

3) 井上勝人, 高岡綾, 土屋正和, 松浦修二: 第6回日本動物実験代替法学会大会, 110 (1992), 抜粋.

4) 井上勝人、原田知明、土屋正和、松浦修司：抜粋44（1994）、第21回抗菌防カビ剤学会総会.日本抗菌防カビ剤学会総会.日本抗菌防カビ剤学会総会.日本抗菌防カビ剤学会総会.日本抗菌防カビ剤学会総会.日本抗菌防カビ剤学会総会.

5) 土屋正和、大石浩之、高岡篤史、房本匡史、松浦修二 Limulus amebocyte lysate を用いた比濁法によるエンドトキシンと (1-3) beta-D-glucan の識別. Chem Pahrm Bull (Tokyo), 38(9). 2523. (1990).4483>

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