A Limulus amebocita lizátum teszt (LAL) a bakteriális endotoxinok kimutatására és mennyiségi meghatározására szolgáló módszer, amelyet a gyógyszeripar és a biotechnológia széles körben használ. A teszt biokémiai elve a Limulus polyphemus, közismert nevén az atlanti patkósrák hemolimfájának alvadási reakcióján alapul mikrobiális felületű antigének, például lipopoliszacharidok vagy bakteriális endotoxinok jelenlétében.

A “Wako Chemicals” cég a LAL-reagenseket nemzetközi szinten gyártó cégek közé tartozik a bakteriális endotoxinokra specifikus LAL-reagens egyedülálló formulájának köszönhetően, amely a mintákban lévő béta-glükánok interferenciája nélkül, a LAL-lal koliofilizált karboximetilált curdlan (CMC) hozzáadásának köszönhetően. A PYROSTAR™ márkanév alatt ez a kutatási reagenseket forgalmazó vállalat olyan LAL-reagenseket és tartozékokat gyárt és forgalmaz, amelyek megfelelnek az amerikai FDA által meghatározott valamennyi normának, előírásnak és minőségi szabványnak.

A következőkben a különböző reagensekről és tartozékokról fogunk beszélni, amelyekkel a Wako hozzájárul a bakteriális endotoxinok vizsgálatához:

Először is, itt van a Limulus PS Simple Test kit, amely lehetővé teszi az endotoxinok kimutatását és mennyiségi meghatározását más, együttesen jelenlévő anyagok zavarása nélkül, az endotoxinok Pyrosep™ nevű affinitási adszorbensének használatával. Ezzel a módszerrel lipofil mintában is mérhetjük az endotoxint, feltéve, hogy az etanolban oldható, mint például a zsírban oldódó vitaminok, olajok és zsírok, albuminok stb. amelyek a hagyományos Limulus teszttel általában nem mérhetők. Ráadásul a LAL-reagens nem kerül pazarlásba, mivel az egyszerű teszt fioláiban egyenként kerül alkalmazásra, és pontosan a méréshez szükséges mennyiségben használható fel.

A PYROSTAR™ ES-F sorozat egy egyedülálló készítmény, amely LAL-lal koliofilizált karboximetilált curdlant (CMC) tartalmaz azzal a céllal, hogy megszüntesse a β-glükánok interferenciáját. A Wako által kifejlesztett ES-puffer magas CMC-koncentrációt tartalmaz, így endotoxin-specifikus LAL-reagenssé válik. Ez a reagens mind az endotoxinok minőségi kimutatására a gélrögös módszerrel, mind pedig a kinetikus turbidimetriás módszerekkel (KTA) történő mennyiségi kimutatására alkalmas. A Wako Pure Chemical Industries, Ltd. által kifejlesztett Toxinometer® nevű fotometriai műszer a zavarossági változás sebességének mérésére szolgál. A PYROSTAR™ ES-F készletek standard kontroll endotoxinnal (SCE) és anélkül is kaphatók: ez egy E.coliból finomított liofilizált reagens, amelyet a LAL-reagens érzékenységének megerősítésére, a termékvizsgálati módszerek validálására és gátlási kontrollok készítésére használnak.

E reagensek támogatására a Wako kifejleszt egy endotoxin extraháló oldatot is, amely képes az endotoxinok kivonására olyan felületekről, ahol azok vízzel vagy sóval nem vonhatók ki. Használata olyan berendezések és eszközök endotoxinmintáinál ajánlott, amelyek érintkezhetnek vért vagy fehérjéket tartalmazó folyadékokkal.

A Toxinometer® ET-6000 egy számítógépes kinetikus inkubációs olvasó, amely 3 vizsgálati módszert képes beépíteni: gél-kocka, KTA és KCA (kinetikus kromogén teszt). Ez a berendezés lehetővé teszi, hogy ugyanabból a mintából gél-kocka és KTA eredményeket kapjunk. Egyidejűleg akár 16 mintát is mér, a mikrolemeznél sokkal kisebb szennyeződési kockázattal, és lehetővé teszi számunkra a standard görbék archiválását. A Toximaster® QC7 az a szoftver, amely a Toxinometer® ET-6000 készülékkel végzett LAL-vizsgálathoz az adatfeldolgozás és a jelentéskészítés összes funkcióját biztosítja.

A Wako LAL-katalógusainak tartozékai között láthatunk továbbá alumíniumfedéllel ellátott és alumíniumfedél nélküli kémcsöveket is. Ezeket a kémcsöveket endotoxinoktól mentesen gyártják, boroszilikát üvegből készülnek, és a gélrögös módszerhez tervezték. Az üveg vastagsága kifejezetten a Toxinométerhez kalibrálható a stabil fényintenzitás és transzmisszió érdekében.

A Wako által forgalmazott másik LAL-reagens a KY Color Limulus készlet. Ez a reagens a KCA módszerhez lett kifejlesztve, és mind a kinetikus olvasóban, mind a mikrolemez olvasóban használható. Tartalmaz egy multiteszt-készletet és egy egyszerű tesztkészletet, amelyek mindegyike időalapú kolorimetrikus analízisre készült, egy sárga színt generáló szintetikus szubsztrát felhasználásával, amely nagy érzékenységgel képes az endotoxin specifikus kimutatására.

Bibliográfia:

1) Iwanaga, S. Biochemical principle of Limulus test for detecting bacterial endotoxins. Proceedings of the Japan Academy, Series B, 83(4), 110-119. (2007).

2) Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test of Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products and Medical Devices. U.S. Dept. of Health & Human Services, FDA, December (1987).

3) Katsuhito Inoue, Aya Takaoka, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 110 (1992), 6th Annual Meeting of the Japanese Society for Alternatives to Animal Experiments.

4) Katsuhito Inoue, Tomoaki Harada, Masakazu Tsuchiya, Shuji Matsuura: Excerpt 44 (1994), 21st Annual Meeting of the Society for Antibacterial and Antifungal Agents.

5) Tsuchiya, M.; Oishi, H.; Takaoka, A.; Fusamoto, M. y Matsuura, S. Discrimination between endotoxin and (1-3) beta-D-glucan using turbidimetric kinetic assay with Limulus amebocyte lysate. Chem Pahrm Bull (Tokyo), 38(9). 2523. (1990).

LAL PRODUCT LINE

LAL Reagent Kit	LAL Accessories

.