3.4.2 Királis gázkromatográfia

Az amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA és MDEA enantiomerjeinek GC-vel történő elválasztását különböző állófázisok használatával írták le. Az l-TPC származékok elválasztását DB-1 (térhálósított metilszilikon) és DB-17 (50% fenil-metilszilikon) egyenértékű GC oszlopokon írták le. A DB-17 oszlop GC-körülményei a következők voltak: kezdeti sütőhőmérséklet 120-210 °C 30 °C/perc, majd 260 °C 6 °C/perc, és 1 percig tartották. A DB-1 oszlop használatával a feltételek 130°C-190°C-ig 4°C/perc, majd 250°C-ig 25°C/perc, majd 2 percig tartva. Mindkét esetben az injektálónyílás és a határfelület hőmérséklete 270°C volt. A megfigyelt ionok a következők voltak: m/z 237 az amfetamin és az MDA esetében, m/z 241 az amfetamin-D5 és az MDA-D5 esetében, m/z 251 a metamfetamin és az MDMA esetében, m/z 255 a metamfetamin-D5 és az MDMA-D5 esetében, m/z 265 az MDEA esetében és m/z 270 az MDEA-D5 esetében. A módszer alkalmas volt az egyes analitok enantiomerjeinek elkülönítésére és azonosítására 5 és 10 000 ng/ml közötti koncentrációban, az egyes enantiomerek teljes tartományában (0-100%). A DB-1 oszlopon minden enantiomer-csúcs könnyen elkülöníthető volt, de a DB-17 oszlopon az MDMA és az MDEA d-enantiomerjei nem voltak elkülöníthetőek. Bár ez sok GC-detektorral problémát okozna, a tömegspektrométer könnyen képes volt szelektíven figyelni az egyes analitok egyedi ionjait és megkülönböztetni őket egymástól. Ráadásul nem valószínű, hogy az MDMA-val és az MDEA-val egyszerre visszaéltek, ezért kicsi annak a valószínűsége, hogy egy mintában mindkét vegyület megtalálható legyen. Az MDEA enantiomerek elemzésének leírásában Paul és munkatársai jelezték a közös ioninterferenciával kapcsolatos problémát, amely megakadályozta, hogy az adott analit esetében egynél több iont használjanak, annak ellenére, hogy különböző deriváló reagenseket és GC-körülményeket alkalmaztak.

Más kutatók is beszámoltak az enantiomer elválasztásról királis prolilszármazékok alkalmazásával .

Fallon és munkatársai az MDMA és metabolitjainak enantiomer diszpozíciójáról számoltak be nyolc egészséges önkéntesnek beadott MDMA (40 mg) beadását követően, amelyet vizelet- és plazmaminták gyűjtése követett. Az extrakciót követően a drogokat MTPA-val deriválták, majd DB-17 oszlopon kromatizálták 50°C-on 2 percig 250°C-ra 25°C/perc, majd 290°C-ra 2°C/perc sebességgel, NPD-t használva a kimutatáshoz. A plazmamintákat extraháltuk, deriváltuk és kromatizáltuk egy DB-1 egyenértékű (HP ultra 1) oszlopon 100°C-on 3 percig 285°C-ig 15°C/perc sebességgel, majd 5 percig tartottuk, és MS-sel elemeztük. Az amfetamin esetében az m/z 119, 139, 162, 189, 189, 260, az MDA esetében a 135, 162, 189, 260, az MDMA esetében a 135, 162, 189, 260 m/z-es ionokat használtuk a vizsgált vegyületek kimutatására. A mennyiségi meghatározás a kábítószerek esetében az m/z 162, a belső standard metoxifenamin esetében pedig az m/z 148 segítségével történt. A vizsgálat szoros egyezést mutatott a tényleges és a mért enantiomer-összetétel között három különböző koncentrációban és négy különböző arányban.

MTPA-t több más szerző is használta (mint korábban említettük) az amfetamin és rokon vegyületek analízisére. Egy DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) és a következő GC-körülmények alkalmazásával: injektorport hőmérséklete 140°C. A kezdeti sütőhőmérsékletet 0,5 percre 140°C-ra állítottuk, majd 15°C/perc sebességgel 215°C-ra, majd 35°C/perc sebességgel 285°C-ra, és 1 percig tartottuk. A transzfervezeték hőmérsékletét 280°C-on tartottuk. Ezt a módszert az amfetamin és a metamfetamin enantiomerek elválasztására használtuk. A metamfetamin enantiomerek 0,07 perc alatt, >7 perc retenciós idővel különültek el, így az enantiomerek 1%-on belülre kerültek egymástól, ami egy analitikai futtatáson belüli elfogadható retenciós időbeli eltérés általános követelménye. Mivel mindkét enantiomer közel eluálódik egymáshoz, fontos gondosan értékelni, hogy a műszer adatrendszere melyik enantiomercsúcsot értékeli. Az eljárás három különböző koncentrációban (500, 2000 és 4000 ng/ml) az amfetamin esetében 0,4-7,2%-os, a metamfetamin esetében pedig 0,5 és 4,0% közötti relatív standard eltéréseket eredményezett. Az 1/X súlyozott regresszióval végzett vizsgálat 25-10 000 ng/ml közötti lineáris tartományt adott. Hasonló eljárást írtak le az MTPA-val derivatizált amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA és MDEA analízisére 5%-os fenil-polisziloxán kapilláris oszlopon (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) a következő GC körülmények alkalmazásával: A sütő hőmérsékletét 0,5 percig 140°C-ról 1,5 percig 15°C/perc sebességgel 215°C-ról 1,5 percig 35°C/perc sebességgel 285°C-ra emeltük, ahol 1,0 percig tartottuk. Az injektor és az átvezető vezeték hőmérséklete 160°C, illetve 260°C volt. A vizsgálat az MDEA esetében 25-5 000 ng/ml, az amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA esetében pedig 25-10 000 ng/ml lineáris tartományt adott. A határkoncentrációnál (500 ng/ml) a szórás ±11%-on belül volt minden analit esetében.

Peters és munkatársai negatív ionos kémiai ionizációs GC-MS-tesztet írtak le az amfetamin és metamfetamin enantiomerek meghatározására plazmában vagy szérumban. Az enantiomereket S-heptafluorobutyrylprolil-kloriddal deriválták és GC-vel elválasztották. A módszer lineáris volt 5 és 250 μg/l között, 88,9-98,6%-os extrakciós hatékonysággal, egyszerű szilárd fázisú extrakcióval. A GC feltételei a következők voltak: 5% fenil-metil-sziloxán oszlop (HP-5MS; 30 m×0,25 mm i.d.); injektálónyílás hőmérséklete 280°C; oszlop hőmérséklete 100°C, amely 30°C/percnél 180°C-ra, 5°C/percnél 230°C-ra és 30°C/percnél 310°C-ra emelkedett; transzfervonal 280°C; NICI, metán (2 ml/perc); forráshőmérséklet 150°C. A megfigyelt ionok a következők voltak: m/z 399, 379 és 439 az amfetamin-d11 esetében és m/z 388, 368 és 428 az amfetamin esetében; (az EMV 400 V-tal megnövelt) m/z 407, 387 és 447 a metamfetamin-d5 esetében és m/z 402, 382 és 442 a metamfetamin esetében. A negatív ionos kémiai ionizáció által biztosított fokozott érzékenység lehetővé tette 0,2 ml-es mintaméret használatát. Egy későbbi publikációban, amely az MDMA metabolikus profilját írja le a kábítószer beadását követően egy ugyanezen szerző által végzett kontrollált vizsgálatban, a vizsgálat alapos validálását is meghatározták . Egy másik, NICI-t használó eljárásban Leis és munkatársai szintén leírtak egy módszert az amfetamin enantiomerek humán plazmában történő mennyiségi elemzésére GC/negatív ionos kémiai ionizációs MS segítségével. A módszer 0,006-50 ng/ml tartományban lineáris volt. Egy 1 ml plazma egyszerű folyékony extrakcióját és (S)-heptafluorobutirilprolil-kloriddal történő deriválását követően a GC körülményei a következők voltak: SGE-BPX5 olvasztott szilikakapilláris oszlop (15 m×0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injektor 280°C, az oszlop hőmérséklete 1 percig 100°C volt, majd 40°C/perc emelkedés 180°C-ra, 5°C/perc 180-195°C között, 40°C/perc 310°C-ra 2 percig, transzfervonal 315°C-ra. A kémiai ionizációt metánnal végeztük 300 mA emissziós árammal. Az e farmakokinetikai vizsgálat során megfigyelt ionok m/z 368,1 és 373,1 volt az amfetamin és a belső standard esetében.

Az MDMA és a rokon regioizomerek analízisét több szerző is leírta, ami segít abban, hogy ezek a szorosan rokon vegyületek könnyen megkülönböztethetők legyenek . A tömegspektrális jellemzők kombinációját és különösen ezen analitok kromatográfiás viselkedését mindkét csoport leírja a vegyületek megfelelő azonosításában betöltött jelentőségükhöz képest. Az optimalizálás azt mutatta, hogy a nagyon lassú programozási sebességek adták a legjobb elválasztást a nem poláros állófázisokon, de a 85 percnél hosszabb futási idő nem volt praktikus. A szűk furatú kapilláris oszlopok használata ugyanazokkal a fázisokkal körülbelül fél órára javította az elemzési időt a megnövelt felbontóképességüknek köszönhetően. A DB-35MS, egy poláris állófázisú oszlop optimalizálása lehetővé tette az MDMA 10 oldallánc- és gyűrűs regioizomerjének felbontását körülbelül 4,5 perc alatt .

.