Conception de l’étude

Dans cet essai à deux bras, en double aveugle et randomisé, nous recruterons 60 femmes enceintes âgées de 19 à 42 ans vivant à Vancouver, BC, Canada. Les participantes seront randomisées pour prendre un supplément quotidien pendant 16 semaines avec soit 0,6 mg/jour d’acide folique, soit une dose équimolaire (0,625 mg/jour) d’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique (Fig. 2). La dose de 0,6 mg correspond aux niveaux trouvés dans les principales marques commerciales de vitamines prénatales (Materna®), ce qui augmente la généralisation de nos résultats. L’intervention de 16 semaines est basée sur la demi-vie estimée du folate des globules rouges et vise à permettre la mesure du statut à long terme du folate dans les globules rouges (après 12-16 semaines). Toutes les participantes recevront également une multivitamine prénatale ne contenant pas de folate, afin de garantir l’apport adéquat d’autres nutriments (par exemple, le fer) pendant la grossesse. Des échantillons de sang veineux à jeun seront prélevés au début et à la fin de l’étude pour mesurer les principaux paramètres, notamment le folate sérique, le folate érythrocytaire et l’UMFA plasmatique ; les mesures exploratoires comprendront la S-adénosyl-méthionine plasmatique, la S-adénosyl-homocystéine, l’homocystéine totale, la cystéine totale, la méthionine, la vitamine B12, le pyridoxal-5-phosphate, la choline libre et la bétaïne. Le génotypage des variants MTHFR (677 C > T, rs1801133, et 1298 A > C, rs1801131) et DHFR (rs1643649 et rs70991108) et une numération sanguine complète seront également déterminés. Les femmes auront l’option de continuer dans la phase post-partum (exploratoire) de l’étude, où lors de leur visite finale, elles recevront plus de suppléments à prendre jusqu’à environ 1 semaine post-partum. Aux jours 5 à 7 du post-partum, les femmes fourniront un petit échantillon de lait maternel (3 ml) et un échantillon de sang veineux à jeun. Les résultats évalués dans le lait maternel comprendront les formes de folate (UMFA, THF, 5-méthyl-THF, 5-formyl-THF et 5,10-méthényl-THF) et le FBP du lait. Les résultats évalués dans l’échantillon de sang du post-partum comprendront le folate RBC et l’UMFA plasmatique. Le protocole de l’étude a été élaboré conformément aux Standard Protocol Items de 2013 : Recommendation for Interventional Trials (SPIRIT) de 2013 (Fig. 3) . Voir le fichier supplémentaire 1 (liste de contrôle SPIRIT) pour plus de détails.

Diagramme du flux des participants

Éléments standard du protocole : Recommandation pour les essais interventionnels (SPIRIT) calendrier de recrutement, d’interventions et d’évaluations

L’objectif principal de cette étude pilote est d’obtenir des estimations de la variation du folate sérique, du folate RBC et de l’UMFA suite à une supplémentation en acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique et en acide folique pendant 16 semaines de grossesse afin d’informer la conception d’un essai définitif suffisamment puissant. L’objectif secondaire est d’obtenir des taux de recrutement et de participation pour aider à la conception et à la faisabilité d’un essai définitif. Les objectifs exploratoires de la phase post-partum sont de quantifier la proportion de folate total du lait maternel sous forme d’acide folique dans chaque groupe, d’évaluer la corrélation entre l’UMFA plasmatique maternel post-partum et l’acide folique du lait maternel, et d’évaluer les concentrations de folate RBC après l’accouchement dans chaque groupe.

Participants, recrutement et consentement éclairé

Critères d’inclusion : (1) femme enceinte (grossesse unique) ; (2) vivant dans la région métropolitaine de Vancouver ; (3) ≤ 21 semaines de gestation au moment du consentement ; (4) âgée de 19 à 42 ans ; et (5) capable de fournir un consentement éclairé.

Critères d’exclusion : (1) conditions médicales préexistantes connues pour avoir un impact sur le statut en folates de la mère (maladies intestinales malabsorptives et inflammatoires, maladie cœliaque active, pontage gastrique, gastrite atrophique, épilepsie, maladie hépatique avancée, dialyse rénale, diabète sucré de type 1 ou 2, trait drépanocytaire/anémie) ; (2) facteurs liés au mode de vie connus pour avoir un impact sur le statut en folates de la mère (tabagisme actuel, consommation d’alcool, usage de drogues récréatives) ; (3) risque moyen à élevé de développer une grossesse affectée par une ATN (s’applique aux femmes ou à leur partenaire masculin : antécédents personnels ou familiaux (parents ou frères et sœurs) d’autres anomalies congénitales sensibles aux folates, antécédents personnels d’ATN ou grossesse antérieure affectée par une ATN) ; (4) médicaments connus pour interférer avec le métabolisme des vitamines B (chloramphénicol, méthotrexate, metformine, sulfasalazine, phénobarbital, phénytoïne, primidone, triamtérène, barbituriques) ; (5) indice de masse corporelle (IMC) avant la grossesse ≥ 30 kg/m2 ; ou (6) allergie à l’un des ingrédients du supplément étudié.

Taille de l’échantillon

La taille de l’échantillon a été calculée en fonction de l’objectif principal, à savoir estimer la distribution (moyenne ± écart-type) du changement dans les résultats primaires (folate sérique, folate RBC et UMFA) après 16 semaines de supplémentation. Pour ce faire, nous aurons besoin de 50 femmes (25 dans chaque groupe) ; un échantillon d’au moins n = 50 est généralement reconnu comme adéquat pour les études pilotes de recherche clinique . Un gonflement de 20 % sera ajouté pour tenir compte des participants qui abandonnent ou des pertes de suivi ; ainsi, un total de 60 femmes (30 dans chaque groupe) sera recruté.

Recrutement

Des affiches seront affichées au BC Women’s Hospital, dans les cliniques médicales et prénatales et dans les établissements de vente au détail pour les femmes enceintes (par exemple, les cours prénataux, les studios de fitness, les magasins de vêtements de maternité) à travers Vancouver, BC, Canada. Les détails de l’étude seront communiqués au personnel et aux professionnels de la santé, y compris les médecins, les sages-femmes, les infirmières et autres, le cas échéant. La publicité sur les médias sociaux (Facebook et Instagram) sera utilisée et ciblée sur les femmes enceintes âgées de 19 à 42 ans dans la grande région de Vancouver, BC.

Obtention du consentement éclairé et confirmation de l’éligibilité

Les femmes intéressées à participer contacteront directement le coordinateur de la recherche (KMC). A ce moment, les détails de l’étude, l’éligibilité et le consentement éclairé seront décrits. Les participantes éligibles qui souhaitent être enrôlées recevront un identifiant d’étude et leur visite de base sera programmée. Les participantes seront invitées à poursuivre leur supplémentation prénatale en multivitamines/folates jusqu’à leur visite initiale. La phase post-partum facultative de l’étude sera décrite dans le formulaire de consentement éclairé ; cependant, les participants qui choisissent de continuer au-delà des 16 semaines primaires recevront un formulaire de consentement distinct à signer.

Visites de l’étude

Les visites de l’étude seront facilitées à Vancouver, en Colombie-Britannique, au Canada, à l’Université de la Colombie-Britannique, Food, Nutrition and Health Building et dans l’unité d’évaluation de la recherche clinique du BC Children and Women’s Hospital. Ligne de base (8-21 semaines de gestation) : Le participant et le coordinateur de la recherche (KMC) signeront le formulaire de consentement éclairé ; une copie sera scannée et envoyée par courriel au participant après la visite de l’étude. Les participants rempliront un questionnaire de base pour recueillir leurs antécédents médicaux et nutritionnels ainsi que des données démographiques. Un questionnaire de fréquence alimentaire validé sera utilisé pour calculer les DFE. Le poids et la taille seront mesurés à l’aide d’une balance électronique et d’un stadiomètre et enregistrés à 0,1 kg et 0,10 m près, respectivement. Un échantillon de 12 ml de sang veineux à jeun pendant 3 heures sera prélevé. Les participants recevront les suppléments de l’étude (soit de l’acide folique, soit de l’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique) et recevront un journal des suppléments pour noter leur consommation quotidienne. Milieu de l’étude : après 8 semaines, toutes les femmes seront contactées pour vérifier qu’elles respectent les consignes, répondre à leurs questions ou préoccupations et fixer une visite finale. Fin de l’étude (24-37 semaines de gestation) : un échantillon de 12 ml de sang veineux à jeun pendant 3 heures sera prélevé, le poids sera mesuré comme décrit ci-dessus et les participantes rempliront un questionnaire final afin de déterminer tout changement dans leur état de santé ou leur consommation de médicaments depuis le début de l’étude. Les participantes renverront leur journal des compléments alimentaires et toutes les capsules restantes seront comptées. Post-partum : lors de la visite finale, les participantes qui prévoient d’allaiter et qui ont un congélateur domestique en état de marche peuvent poursuivre dans la phase post-partum de l’étude. Une fois le consentement obtenu à l’aide d’un second formulaire de consentement éclairé, elles recevront des compléments à continuer de prendre jusqu’à environ 1 semaine après l’accouchement et un nouveau journal des compléments. Les participantes seront formées à la collecte d’un petit échantillon de lait maternel (3 ml) à leur domicile entre les jours 5 et 7 du post-partum et recevront toutes les fournitures nécessaires (décrites plus en détail dans la section « Collecte et traitement du lait maternel » ci-dessous). Les participantes conserveront leur échantillon de lait maternel au congélateur et informeront la coordinatrice de la recherche lorsqu’il sera prêt à être récupéré. La collecte aura lieu dans les 4 jours suivant la notification et un échantillon de sang veineux de 12 ml sera prélevé à ce moment-là. Les femmes recevront la consigne de prendre leur supplément de folate 2 h avant la collecte des échantillons de lait maternel et de sang afin de normaliser le pic de l’UMFA plasmatique (et potentiellement l’absorption de l’UMFA dans le lait maternel ; cependant, le moment de ce processus n’est pas bien décrit).

Suppléments de l’étude

L’acide folique et l’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique seront fournis séparément des multivitamines prénatales. Cette décision a été prise car certaines femmes signalent une intolérance lors de la consommation de multivitamines prénatales ; cela est généralement dû à la teneur élevée en fer et se résout après le premier trimestre . En cas d’intolérance temporaire, les participantes peuvent sauter ou prendre une demi-dose de leur multivitamine, tout en continuant à prendre la dose complète de folate. Les ingrédients en vrac pour l’acide folique et les multivitamines prénatales ont été fournis par Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada). L’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique (Metafolin®) en vrac a été fourni par Merck & Cie (Schaffhausen, Suisse). Tous les ingrédients en vrac ont été transformés en capsules de gel végétal chez Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada). Les capsules d’acide folique et d’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique sont d’apparence identique pour permettre le double aveuglement. La multivitamine prénatale contient la même formulation de micronutriments que WN Pharmaceuticals Ltd.® Prenatal (NPN 80025456), sauf que l’acide folique a été retiré. Un sommaire global de qualité a été complété pour tous les suppléments de l’étude par Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada) et vérifié par Santé Canada, avec confirmation des doses d’acide folique et d’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique par chromatographie liquide à haute performance. Un avis d’autorisation pour la demande d’essais cliniques (soumission n° 244456) a été fourni par la direction des produits de santé naturels et en vente libre de Santé Canada le 26 juillet 2019.

Double insu, randomisation et fourniture de packs de suppléments

Un assistant de recherche indépendant de Natural Factors (Coquitlam, BC, Canada) attribuera des codes d’insu (A ou B) aux suppléments d’acide folique et d’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique. Les bouteilles de suppléments de folate seront étiquetées avec « A » ou « B » et indiqueront que « les capsules sont soit de l’acide folique, soit du folate. » Les participants et l’équipe de recherche principale ne connaîtront pas la répartition des suppléments, qui ne sera décodée qu’une fois les analyses statistiques finales terminées. La séquence de randomisation sera générée par ordinateur par un statisticien indépendant, en utilisant des blocs de quatre qui contiennent chacun deux participants par groupe de supplément. L’équipe de recherche principale ne connaîtra pas la séquence de randomisation. Lors de la visite de base de chaque participant, le coordinateur de la recherche (KMC) lèvera l’insu sur l’attribution (A ou B) pour cette ID d’étude uniquement afin de fournir les compléments alimentaires attribués. Au début de l’étude, les participantes recevront un paquet de suppléments contenant toutes les capsules pour l’intervention de 16 semaines ; si les participantes choisissent de continuer à la phase post-partum de l’étude, elles recevront plus de suppléments lors de leur visite finale pour continuer à prendre jusqu’à ~ 1 semaine post-partum.

Médicaments concomitants

Une fois inscrites, il n’y aura pas de restrictions sur la prise de médicaments tout au long de la période d’intervention ; cependant, tous les médicaments doivent être déclarés. La seule exception sera les compléments alimentaires contenant des folates/acides foliques, qui ne seront pas autorisés pendant toute la période d’intervention.

Stratégies pour améliorer l’adhésion

Les femmes enceintes ont tendance à être très motivées et sont généralement intéressées par la participation à des essais de recherche clinique . Selon une enquête de l’Agence de la santé publique du Canada, 94 % des femmes de la Colombie-Britannique prennent un supplément de multivitamines prénatales pendant la grossesse . Par conséquent, les participantes seront probablement habituées à prendre un supplément quotidien au moment de leur inscription. Le coordinateur de la recherche (KMC) contactera chaque participant à mi-parcours (8 semaines après la visite de référence) pour répondre à toute question ou préoccupation. En outre, le paquet de suppléments permettra un stockage organisé des suppléments à la maison et le journal des suppléments servira de rappel quotidien pour améliorer l’adhésion tout au long des 16 semaines. Pour ces raisons, nous prévoyons une forte adhésion (> 90%) au protocole de l’étude.

Prélèvement et traitement des échantillons sanguins

Des échantillons de sang veineux (12 ml au total) seront prélevés dans un tube d’acide éthylène diamine tétraacétique

(EDTA) de 6 ml, un tube EDTA de 2 ml et un tube de sérum de 4 ml (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) lors des visites de base, de fin d’étude et post-partum (le cas échéant). Les prélèvements sanguins de base et finaux seront effectués après un jeûne de 3 heures ; ce délai est suffisant pour réduire l’influence confondante d’un apport récent en folates sur les concentrations sériques. L’échantillon de sang post-partum (~ 1 semaine après l’accouchement) ne sera pas à jeun, car cela n’influencera pas les folates des globules rouges et réduira la charge de travail des participants. Après le prélèvement, les tubes seront protégés de la lumière, inversés doucement selon les recommandations du fabricant, placés dans une glacière et transportés au laboratoire pour un traitement immédiat (dans les 2 heures suivant le prélèvement).

Pour la préparation de l’hémolysat de sang total, le sang total (0,3 ml) sera retiré du tube EDTA de 6 ml et dilué au 1/11 en ajoutant 3,0 ml d’une solution d’acide ascorbique à 1 %, puis incubé à 37 °C pendant 30 minutes. Le tube EDTA de 6 ml sera ensuite centrifugé à 3000 rpm pendant 15 minutes à 4 °C. Le plasma sera collecté et (pour les échantillons de base et finaux uniquement) le contenu restant du tube EDTA de 6 ml sera traité pour l’isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) avec le protocole d’isolement PBMC SepMate (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada). Le tube EDTA de 2 ml sera utilisé pour une numération sanguine complète. Le tube de sérum de 4 ml sera laissé à température ambiante pendant ~ 30 min (jusqu’à coagulation), puis centrifugé à 3000 tours/minute pendant 15 min à 4 °C ; le sérum sera recueilli. Toutes les aliquotes seront stockées à – 80 °C jusqu’à ce qu’elles soient analysées.

Collecte et traitement du lait maternel

Les femmes auront pour instruction de collecter le lait maternel les jours 5 à 7 du post-partum entre 13h00 et 14h50 (car la concentration moyenne en folates pendant cette période semble être représentative des concentrations moyennes en folates sur une période de 24 heures) , 2 à 3 heures après leur dernière expression complète. Les participantes exprimeront complètement le lait maternel (manuellement ou à l’aide d’un tire-lait électrique) du sein droit. Une fois le lait maternel exprimé, les femmes seront invitées à remuer doucement le lait pour le mélanger, puis, à l’aide d’une pipette falcon stérile, elles transféreront 0,5 ml dans deux cryovials ambrés (contenant chacun 0,005 g d’acide ascorbique pour une dilution de 1 %) et 1 ml dans deux cryovials ambrés. Tous les cryovials seront clairement marqués aux niveaux de 0,5 et 1 ml. Les femmes placeront tous les flacons dans une boîte de congélation qui sera conservée au congélateur pendant 4 jours maximum. Les échantillons seront prélevés congelés et transférés au laboratoire pour être conservés à – 80 °C jusqu’à leur analyse ultérieure.

Analyses de laboratoire

Les folates sériques (nmol/L) et les folates RBC (nmol/L) seront analysés par dosage microbiologique, selon les recommandations mondiales, en utilisant la méthode des plaques de microtitration décrite par Molloy et.al . Le folate RBC (nmol/L) sera calculé selon la formule suivante :

Biomarqueurs plasmatiques dont UMFA (nmol/L), S-adénosyl-méthionine (μmol/L), S-adénosyl homocystéine (μmol/L), homocystéine totale (μmol/L), cystéine totale (μmol/L), méthionine (μmol/L), choline libre (μmol/L) et bétaïne (μmol/L) seront analysées par spectrométrie de masse par chromatographie liquide . La vitamine B12 (pmol/L) sera analysée à l’aide d’un immunoanalyseur. Le pyridoxal-5-phosphate (nmol/L) sera analysé par spectrométrie de masse en chromatographie liquide en tandem. Les variants génétiques seront génotypés à l’aide de tests de génotypage SNP TaqMan. Une numération sanguine complète sera effectuée à l’aide d’un analyseur hématologique automatisé (Sysmex XNL-550). Les formes de folate du lait maternel (y compris l’UMFA, le THF, le 5-méthyl-THF, le 5-formyl-THF et le 5,10-méthényl-THF) seront quantifiées par chromatographie en phase liquide avec spectrométrie de masse en tandem ; le folate total représentera la somme de ces formes. Les concentrations de FBP dans le lait maternel seront mesurées à l’aide d’une procédure de dosage radio par liaison compétitive (telle que décrite par Selhub et al.) .

Résumé des données à recueillir

Données démographiques, médicales et nutritionnelles via des questionnaires structurés

La collecte de données de base comprendra l’âge, l’ethnicité, la parité, l’éducation, la profession, le revenu du ménage, les antécédents médicaux et médicamenteux, le poids déclaré avant la grossesse, le régime alimentaire général (y compris la consommation d’aliments végétaliens, végétariens, cétogènes, sans gluten et tout aliment/groupe alimentaire évité pour une raison quelconque) et l’utilisation de suppléments. La collecte de données de fin d’étude comprendra tout changement dans la santé générale ou l’utilisation de médicaments depuis la visite de base.

Anthropométrie

L’IMC avant la grossesse sera calculé en utilisant le poids avant la grossesse auto-déclaré et la taille mesurée. Les mesures des participantes seront prises au début (poids et taille) et à la fin (poids seulement) pour le calcul de la prise de poids gestationnelle tout au long de la période d’intervention et de la prise de poids totale tout au long de la grossesse (en utilisant le poids autodéclaré avant la grossesse et le poids mesuré à la fin).

Évaluation alimentaire

Les DFE totaux (μg/jour) provenant des folates alimentaires et de l’acide folique complémentaire seront calculés à l’aide du Block Folic Acid/Dietary Folate Equivalents Screener (NutritionQuest, Berkeley, CA, USA), un questionnaire de fréquence alimentaire validé .

Données post-partum

Les semaines totales de supplémentation, les semaines de gestation à l’accouchement, le respect du protocole de collecte du lait maternel et le moment de la supplémentation en folates avant la collecte du lait maternel et des échantillons sanguins post-partum seront enregistrés.

Critères de retrait

Les critères de retrait comprennent l’interruption spontanée ou planifiée de la grossesse, l’utilisation de suppléments nutritionnels supplémentaires contenant du folate/acide folique et suite à un événement indésirable/grave associé aux suppléments/à l’intervention de l’essai (tel que déterminé par l’investigateur qualifié (CM)). Les participants peuvent également se retirer d’eux-mêmes à tout moment et aucune autre information ne sera recueillie. Quelle que soit la raison du retrait, toutes les données recueillies précédemment seront conservées pour l’analyse. Les participantes qui accouchent avant leur visite finale auront la possibilité de continuer dans la phase post-partum de l’étude, étant donné qu’elles continuent à se supplémenter quotidiennement avec les suppléments de l’étude.

Manipulation des données et confidentialité

Toutes les données et les échantillons biologiques seront identifiés à l’aide de l’identifiant d’étude de chaque participant. Les données avec des identifiants personnels seront stockées sur un ordinateur crypté et protégé par un mot de passe dans un espace serveur sécurisé avec l’Institut de recherche de l’hôpital pour enfants de la Colombie-Britannique. Les données avec identifiants personnels déliés seront nettoyées et une double saisie sera effectuée par le coordinateur de la recherche (KMC) et un assistant de recherche indépendant dans REDCap (Research Electronic Data Capture) hébergé par le BC Children’s Hospital Research Institute. KMC, JAH et CDK auront accès à l’ensemble des données finales. Les documents papier seront conservés dans un classeur fermé à clé et les échantillons biologiques seront conservés dans un congélateur fermé à clé situé dans le laboratoire du chercheur principal (CDK) à l’Université de Colombie-Britannique. Les participants pourront être informés de leur allocation de supplément de folate et des résultats de folate dans le sang/le lait maternel (le cas échéant) (y compris les EFD, le folate sérique et le folate RBC au début, à la fin et après l’accouchement, et les concentrations totales de folate dans le lait maternel) après la fin des analyses statistiques finales.

Données et analyse statistique

Des statistiques descriptives seront utilisées pour les données de base des participants. Les variables continues seront rapportées avec une moyenne ± écart-type (ou médiane et intervalle interquartile si elles ne sont pas normalement distribuées) et les variables catégorielles sous forme de nombres absolus par groupe et de pourcentage. Le nombre de gélules sera utilisé pour calculer l’adhésion des participants et le journal des suppléments sera utilisé pour fournir un aperçu descriptif des obstacles à l’adhésion. La normalité des données sera évaluée et des transformations ou l’utilisation de tests non-paramétriques équivalents seront envisagés si les données ne suivent pas une distribution normale. Les analyses statistiques seront effectuées à l’aide de Stata (StataCorp, College Station, TX, USA). Toutes les analyses seront initialement réalisées en intention de traiter selon l’allocation initiale des groupes au début de l’étude et sans aucune imputation pour les données manquantes. Des analyses secondaires per-protocole seront réalisées en incluant les personnes qui ont entièrement terminé l’étude et qui ont respecté le protocole de l’étude. L’imputation multiple sera utilisée pour corriger les données manquantes, le cas échéant, dans les analyses de sensibilité .

Analyses primaires

Nous calculerons la moyenne ± l’écart-type des résultats primaires (folate sérique, folate RBC et UMFA plasmatique) dans chaque groupe au début et à la fin de l’étude, ainsi que la moyenne ± l’écart-type de la variation intra-femme de ces résultats dans chaque groupe. Ces estimations seront utilisées pour informer le calcul de la taille de l’échantillon de l’essai définitif.

Analyses secondaires

Des analyses exploratoires des résultats primaires seront menées à l’aide d’un modèle de régression linéaire multiple afin d’étudier si le changement entre la ligne de base et la ligne finale diffère selon le statut du traitement, en ajustant les valeurs de base et les variables explicatives (DFE, biomarqueurs exploratoires, semaines de gestation lors de l’initiation du supplément). La proportion de femmes présentant un taux d’UMFA ≥ 0,2 nmol/L (considéré comme une concentration détectable) au début et à la fin de l’étude dans chaque groupe sera également calculée. Pour informer notre objectif secondaire, le taux de participation global à l’étude sera estimé en divisant le nombre total de femmes inscrites par le nombre total de femmes qui étaient intéressées par une participation. Le taux de recrutement hebdomadaire sera estimé en divisant le nombre total de femmes inscrites par le nombre total de semaines qu’il a fallu pour les recruter. Le taux de rétention des participantes sera estimé en divisant le nombre de femmes qui terminent l’essai complet par le nombre total de femmes inscrites. Pour chaque stratégie de recrutement (y compris les affiches, les médias sociaux, le bouche à oreille), la portée totale (médias sociaux uniquement), les demandes de renseignements, les inscriptions et le coût seront évalués. Les chances de s’inscrire après s’être renseigné pour chaque stratégie seront évaluées à l’aide d’un rapport de cotes. Selon la disponibilité, les raisons de la non-inscription seront enregistrées.

Analyses post-partum

Nous calculerons la moyenne ± l’écart-type pour la proportion d’acide folique dans le lait maternel (en divisant la concentration d’acide folique du lait maternel par la somme de toutes les formes de folate du lait maternel) et pour le folate RBC post-partum maternel. Une régression linéaire sera utilisée pour estimer l’association entre la concentration d’acide folique dans le lait maternel et l’UMFA plasmatique post-partum de la mère. Les résultats post-partum seront analysés plus en détail à l’aide d’une régression linéaire multiple, en ajustant les valeurs finales et les variables explicatives (DFE, nombre total de semaines de supplémentation, respect du protocole de collecte du lait maternel).

Sécurité

L’acide folique est fourni à une dose qui répond aux recommandations canadiennes pour les femmes enceintes (0,4-1,0 mg/jour) ; il est donc considéré comme à faible risque. Le sel de calcium de l’acide (6S)-5-méthyltétrahydrofolique est reconnu comme sûr et est inclus dans les multivitamines prénatales canadiennes sans limite supérieure tolérable établie (aucun risque de préjudice n’est actuellement connu). La randomisation aura lieu entre la 8e et la 21e semaine de gestation (après la fermeture du tube neural). Compte tenu du faible risque de cette étude pilote, la constitution d’un comité de surveillance des données n’a pas été jugée nécessaire. Tous les problèmes de sécurité et, si nécessaire, la décision de mettre fin à l’essai, seront traités par les chercheurs principaux (CDK et JAH) et un chercheur qualifié (CM) et signalés au comité d’éthique de la recherche et à Santé Canada. La levée de l’insu des codes d’intervention peut être entreprise à tout moment si cela est jugé nécessaire pour la surveillance de la sécurité des participants.