3.4.2 Chromatographie en phase gazeuse chirale

La séparation des énantiomères de l’amphétamine, de la méthamphétamine, de la MDA, de la MDMA et de la MDEA par GC en utilisant différentes phases stationnaires a été décrite . La séparation des dérivés de la l-TPC a été décrite sur des colonnes de GC équivalentes à la DB-1 (méthyl silicone réticulée) et à la DB-17 (50% phényl méthyl silicone). Les conditions de GC pour la colonne DB-17 étaient une température initiale de four de 120-210°C à 30°C/min, puis à 260°C à 6°C/min et maintenue pendant 1 min. En utilisant la colonne DB-1, les conditions étaient de 130°C à 190°C à 4°C/min, puis à 250°C à 25°C/min et maintenues pendant 2 min. Dans les deux cas, les températures de l’orifice d’injection et de l’interface étaient de 270°C. Les ions suivis étaient m/z 237 pour l’amphétamine et la MDA, m/z 241 pour l’amphétamine-D5 et la MDA-D5, m/z 251 pour la méthamphétamine et la MDMA, m/z 255 pour la méthamphétamine-D5 et la MDMA-D5, m/z 265 pour la MDEA et m/z 270 pour la MDEA-D5. La méthode a pu être utilisée pour séparer et identifier les énantiomères de chacun des analytes à des concentrations allant de 5 à 10 000 ng/ml dans toute la gamme (0-100 %) de chaque énantiomère. Tous les pics d’énantiomères ont été facilement séparés sur la colonne DB-1, mais sur la DB-17, les énantiomères d de la MDMA et de la MDEA n’ont pas été résolus. Alors que cela poserait un problème avec de nombreux détecteurs de chromatographie en phase gazeuse, le spectromètre de masse a pu facilement surveiller sélectivement les ions uniques de chacun des analytes et les distinguer les uns des autres. En outre, il est peu probable de trouver de la MDMA et de la MDEA consommées en même temps, la probabilité qu’un échantillon contienne les deux composés est donc faible. Dans la description de l’analyse des énantiomères de la MDEA, Paul et al. ont indiqué un problème d’interférence d’ions communs qui empêchait l’utilisation de plus d’un seul ion pour cet analyte malgré l’utilisation d’un réactif de dérivation et de conditions de GC différents.

D’autres chercheurs ont également rapporté la séparation d’énantiomères en utilisant des dérivés prolyliques chiraux.

Fallon et al. ont rapporté la disposition énantiomérique de la MDMA et des métabolites après l’administration de MDMA (40 mg) à huit volontaires sains, suivie de la collecte d’échantillons d’urine et de plasma. Après extraction, les drogues ont été dérivées à l’aide de MTPA, et chromatographiées sur une colonne DB-17 à 50°C pendant 2 min à 250°C à 25°C/min puis à 290°C à 2°C/min en utilisant le NPD pour la détection. Les échantillons de plasma ont été extraits, dérivés et chromatographiés sur une colonne équivalente DB-1 (HP ultra 1) à 100°C pendant 3 min jusqu’à 285°C à 15°C/min et maintenus pendant 5 min et analysés par MS. Les ions à m/z 119, 139, 162, 189, 260 pour l’amphétamine, 135, 162, 189, 260 pour la MDA, 135, 162, 189, 260 pour la MDMA ont été utilisés pour détecter les composés d’intérêt. La quantification a été réalisée en utilisant m/z 162 pour les drogues et m/z 148 pour l’étalon interne méthoxyphénamine. L’essai a montré une étroite concordance entre la composition réelle et mesurée des énantiomères à trois concentrations différentes et à quatre rapports différents.

Le MTPA a été utilisé par un certain nombre d’autres auteurs (comme indiqué précédemment) pour l’analyse de l’amphétamine et des composés apparentés. En utilisant un DB-5MS (20 m × 0,18 mm de diamètre interne ; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) et des conditions de GC de : température de l’orifice de l’injecteur 140°C. La température initiale du four a été réglée à 140°C pendant 0,5 min puis à 215°C à 15°C/min puis à 285°C à 35°C/min et maintenue pendant 1 min. La température de la ligne de transfert a été maintenue à 280°C. Cette méthode a été utilisée pour la séparation des énantiomères d’amphétamine et de méthamphétamine. Les énantiomères de la méthamphétamine ont été séparés de 0,07 min à un temps de rétention de >7 min, ce qui place les énantiomères à moins de 1% l’un de l’autre, une exigence courante pour une variation acceptable du temps de rétention dans une série d’analyses. Comme les deux énantiomères éluent de façon rapprochée, il est important d’évaluer soigneusement quel pic d’énantiomère est évalué par le système de données de l’instrument. La procédure a donné des écarts types relatifs, à trois concentrations différentes (500, 2000 et 4000 ng/mL) de 0,4 à 7,2% pour l’amphétamine et de 0,5 à 4,0% pour la méthamphétamine. Le dosage, utilisant une régression pondérée 1/X, a donné une gamme linéaire de 25 à 10 000 ng/mL. Une procédure similaire a été décrite pour l’analyse de l’amphétamine, de la méthamphétamine, du MDA, de la MDMA et de la MDEA dérivées du MTPA sur une colonne capillaire de polysiloxane phénylique à 5 % (15 m × 0,25 mm de diamètre intérieur ; J&W Scientific Rancho Cordova) en utilisant les conditions de GC suivantes : La température du four a été augmentée de 140°C pendant 0,5 min à 215°C à 15°C/min pendant 1,5 min à 285°C à 35°C/min où elle a été maintenue pendant 1,0 min. Les températures de l’injecteur et de la ligne de transfert étaient de 160°C et 260°C, respectivement. L’essai a donné une gamme linéaire de 25 à 5 000 ng/mL pour la MDEA et de 25 à 10 000 ng/mL pour l’amphétamine, la méthamphétamine, la MDA, la MDMA. La variation à la concentration seuil (500 ng/mL) était de ±11% pour tous les analytes.

Peters et al. ont décrit un test GC-MS à ionisation chimique négative pour la détermination des énantiomères d’amphétamine et de méthamphétamine dans le plasma ou le sérum. Les énantiomères ont été dérivés avec du chlorure de S-heptafluorobutyrylprolyl et séparés à l’aide d’un GC. La méthode était linéaire de 5 à 250 μg/L avec des efficacités d’extraction de 88,9 à 98,6 % en utilisant une extraction simple en phase solide. Les conditions de GC étaient les suivantes : colonne de phénylméthylsiloxane à 5 % (HP-5MS ; 30 m×0,25 mm de diamètre interne) ; température de l’orifice d’injection, 280 °C ; température de la colonne, 100 °C augmentée à 180 °C à 30 °C/min, à 230 °C à 5 °C/min, et à 310 °C à 30 °C/min, ligne de transfert, 280 °C ; NICI, méthane (2 mL/min) ; température de la source, 150 °C. Les ions surveillés étaient : m/z 399, 379 et 439 pour l’amphétamine-d11, et m/z 388, 368 et 428 pour l’amphétamine ; (VME augmentée de 400 V) m/z 407, 387 et 447 pour la méthamphétamine-d5 et m/z 402, 382 et 442 pour la méthamphétamine. La sensibilité accrue offerte par l’ionisation chimique à ions négatifs a permis l’utilisation d’un échantillon de 0,2 mL. Dans une publication ultérieure décrivant le profil métabolique de la MDMA après l’administration du médicament dans une étude contrôlée par le même auteur, une validation complète de l’essai a également été décrite. Dans une autre procédure utilisant NICI, Leis et al. ont également décrit une méthode d’analyse quantitative des énantiomères d’amphétamine dans le plasma humain par GC/MS à ionisation chimique négative. La méthode était linéaire dans une plage de 0,006-50 ng/mL. Après une extraction liquide simple d’un 1 mL de plasma et une dérivatisation avec le chlorure de (S)-heptafluorobutyrylprolyle, les conditions de GC utilisées étaient les suivantes : Colonne capillaire en silice fondue SGE-BPX5 (15 m×0,25 mm de diamètre interne ; ThermoQuest), injecteur 280°C, température de la colonne 100°C pendant 1 min, suivie d’une augmentation de 40°C/min jusqu’à 180°C, 5°C/min de 180 à 195°C, 40°C/min jusqu’à 310°C pendant 2 min, ligne de transfert 315°C. L’ionisation chimique a été réalisée avec du méthane avec un courant d’émission de 300 mA. Les ions suivis pour cette étude pharmacocinétique étaient m/z 368,1 et 373,1 pour l’amphétamine et l’étalon interne, respectivement.

L’analyse de la MDMA et des régioisomères apparentés a été décrite par plusieurs auteurs, contribuant à assurer que ces composés étroitement apparentés puissent être facilement différenciés . La combinaison des caractéristiques spectrales de masse et surtout le comportement chromatographique de ces analytes sont décrits par les deux groupes par rapport à leur importance pour l’identification correcte de ces composés. L’optimisation a montré que des vitesses de programme très lentes donnaient la meilleure séparation sur des phases stationnaires non polaires, mais que le temps d’exécution de plus de 85 minutes n’était pas pratique. L’utilisation de colonnes capillaires à alésage étroit avec les mêmes phases a permis de réduire le temps d’analyse à environ une demi-heure en raison de leur pouvoir de résolution accru. L’optimisation d’une DB-35MS, une colonne à phase stationnaire polaire, a permis la résolution de 10 régioisomères de chaîne latérale et de cycle de la MDMA en environ 4,5 min .

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