Muokatut CRISPR/Cas9-entsyymit parantavat erottelukykyä hidastamalla DNA:n pilkkoutumista, jotta kohteen ulkopuolinen DNA vapautuisi
HypaCas9:ssä ja Cas9-HF1:ssä on havaittavissa hitaita havaittavia pilkkoutumisnopeuksia Aloitamme kineettiset analyysimme mittaamalla entsyymin aktiivisen paikan konsentraatioita kullekin Cas9-varianteille23,24,25. Mittaamalla entsyymin titrauksessa muodostuneen tuotteen määrää kasvavilla DNA-pitoisuuksilla saatiin aktiivisen alueen pitoisuuksiksi 31 nM, 26 nM, 23 nM SpCas9:llä, HypaCas9:llä ja Cas9-HF1:llä vastaavasti entsyyminäytteille, joiden nimellispitoisuus oli 100 nM perustuen absorbanssiin 280 nm:ssä (täydentävät kuvat 1a-d). Mittasimme […]