3.4.2 Kiraalinen kaasukromatografia

Amfetamiinin, metamfetamiinin, MDA:n, MDMA:n ja MDEA:n enantiomeerien erottaminen kaasukromatografiassa eri asemafaaseja käyttäen on kuvattu . L-TPC-johdannaisten erottaminen kuvattiin DB-1 (ristisilloitettu metyylisilikoni) ja DB-17 (50 % fenyylimetyylisilikoni) -ekvivalenttisilla GC-kolonneilla. DB-17-kolonnin GC-olosuhteet olivat uunin alkulämpötila 120-210 °C:ssa 30 °C/min, sitten 260 °C:ssa 6 °C/min ja pito 1 minuutin ajan. DB-1-kolonnia käytettäessä olosuhteet olivat 130-190 °C 4 °C/min, sitten 250 °C 25 °C/min ja pidettiin 2 minuuttia. Molemmissa tapauksissa injektioportin ja rajapinnan lämpötilat olivat 270 °C. Seuratut ionit olivat m/z 237 amfetamiinille ja MDA:lle, m/z 241 amfetamiini-D5:lle ja MDA-D5:lle, m/z 251 metamfetamiinille ja MDMA:lle, m/z 255 metamfetamiini-D5:lle ja MDMA-D5:lle, m/z 265 MDEA:lle ja m/z 270 MDEA-D5:lle. Menetelmää voitiin käyttää kunkin analyytin enantiomeerien erottamiseen ja tunnistamiseen pitoisuuksilla, jotka vaihtelivat 5-10 000 ng/ml, kunkin enantiomeerin koko pitoisuusalueella (0-100 %). Kaikki enantiomeerien piikit erotettiin helposti DB-1-kolonnilla, mutta DB-17-kolonnilla MDMA:n ja MDEA:n d-enantiomeerit eivät erottuneet. Vaikka tämä aiheuttaisi ongelmia monissa GC-detektoreissa, massaspektrometri pystyi helposti seuraamaan selektiivisesti kunkin analyytin yksilöllisiä ioneja ja erottamaan ne toisistaan. Lisäksi on epätodennäköistä, että sekä MDMA:ta että MDEA:ta käytettäisiin väärin samaan aikaan, joten todennäköisyys, että näytteessä olisi molempia yhdisteitä, olisi pieni. MDEA:n enantiomeerien analyysin kuvauksessa Paul et al. viittasivat yhteisten ionien aiheuttamiin häiriöihin, jotka estivät useamman kuin yhden ionin käytön kyseiselle analyytille, vaikka käytettiin erilaista johdannaisreagenssia ja GC-olosuhteita.

Muut tutkijat ovat myös raportoineet enantiomeerien erottelusta käyttämällä kiraalisia prolyylijohdannaisia .

Fallon et al. raportoivat MDMA:n ja metaboliittien enantiomeerisen disposition MDMA:n (40 mg) antamisen jälkeen kahdeksalle terveelle vapaaehtoiselle, minkä jälkeen kerättiin virtsa- ja plasmanäytteet. Uuttamisen jälkeen huumeet derivatisoitiin MTPA:lla ja kromatografoitiin DB-17-kolonnilla 50 °C:ssa 2 minuutin ajan 250 °C:seen 25 °C/min ja sitten 290 °C:seen 2 °C/min käyttäen NPD:tä detektointiin. Plasmanäytteet uutettiin, derivatisoitiin ja kromatografoitiin DB-1-ekvivalenttia (HP ultra 1) vastaavalla pylväällä 100 °C:ssa 3 minuutin ajan 285 °C:seen 15 °C/min ja pidettiin 5 minuutin ajan, ja ne analysoitiin MS-analyysillä. Ioneja m/z 119, 139, 162, 189, 260 amfetamiinille, 135, 162, 189, 260 MDA:lle, 135, 162, 189, 260 MDMA:lle käytettiin kiinnostavien yhdisteiden havaitsemiseen. Kvantitointiin käytettiin m/z 162 huumausaineille ja m/z 148 sisäiselle standardille metoksifenamiinille. Määritys osoitti, että todellisen ja mitatun enantiomeerikoostumuksen välillä vallitsi läheinen yhteisymmärrys kolmella eri pitoisuudella ja neljällä eri suhdeluvulla.

MTPA:ta käytettiin useiden muiden kirjoittajien toimesta (kuten aiemmin todettiin) amfetamiinin ja siihen liittyvien yhdisteiden analysointiin. Käytettiin DB-5MS:ää (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) ja GC-olosuhteita: injektorin portin lämpötila 140 °C. Uunin alkulämpötila asetettiin 140 °C:een 0,5 minuutiksi, sitten 215 °C:een 15 °C/min ja sitten 285 °C:een 35 °C/min ja pidettiin 1 minuutin ajan. Siirtolinjan lämpötila pidettiin 280 °C:ssa. Tätä menetelmää käytettiin amfetamiinin ja metamfetamiinin enantiomeerien erottamiseen. Metamfetamiinin enantiomeerit erotettiin toisistaan 0,07 minuutilla retentioajalla >7 minuuttia, jolloin enantiomeerit olivat 1 prosentin sisällä toisistaan, mikä on yleinen vaatimus hyväksyttävälle retentioaikavaihtelulle analyyttisessä ajossa. Koska molemmat enantiomeerit eluoituvat lähellä toisiaan, on tärkeää arvioida huolellisesti, kumman enantiomeerin piikkiä laitteen tietojärjestelmä arvioi. Menetelmällä saatiin kolmella eri pitoisuudella (500, 2000 ja 4000 ng/ml) suhteelliset standardipoikkeamat, jotka olivat amfetamiinin osalta 0,4-7,2 % ja metamfetamiinin osalta 0,5-4,0 %. Määritys, jossa käytettiin 1/X-painotettua regressiota, antoi lineaarisen alueen 25-10 000 ng/ml. Samanlainen menettely kuvattiin MTPA-derivoidun amfetamiinin, metamfetamiinin, MDA:n, MDMA:n ja MDEA:n analysoimiseksi 5-prosenttisella fenyylipolysiloksaanikapillaarikolonnilla (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) käyttäen seuraavia GC-olosuhteita: Uunin lämpötilaa nostettiin 140 °C:sta 0,5 minuutin ajan 215 °C:een 15 °C/min 1,5 minuutin ajan 285 °C:een 35 °C/min, jossa sitä pidettiin 1,0 minuutin ajan. Injektorin lämpötila oli 160 °C ja siirtolinjan lämpötila 260 °C . Määrityksen lineaarinen alue oli 25-5 000 ng/ml MDEA:lle ja 25-10 000 ng/ml amfetamiinille, metamfetamiinille, MDA:lle ja MDMA:lle. Vaihtelu raja-arvokonsentraatiossa (500 ng/ml) oli ±11 %:n sisällä kaikkien analyyttien osalta.

Peters et al. kuvasivat negatiivisen ionin kemiallisen ionisaation GC-MS-määrityksen amfetamiinin ja metamfetamiinin enantiomeerien määrittämiseksi plasmasta tai seerumista. Enantiomeerit derivatisoitiin S-heptafluorobutyrylprolyylikloridilla ja erotettiin GC:llä. Menetelmä oli lineaarinen 5-250 μg/l välillä ja uuttotehokkuus oli 88,9-98,6 % käyttäen yksinkertaista kiinteän faasin uuttoa. GC-olosuhteet olivat seuraavat: 5 % fenyylimetyylisiloksaanikolonni (HP-5MS; 30 m × 0,25 mm i.d.); injektioportin lämpötila 280 °C; kolonnin lämpötila 100 °C, joka nousi 180 °C:een 30 °C/min, 230 °C:een 5 °C/min ja 310 °C:een 30 °C/min, siirtolinja 280 °C; NICI, metaani (2 ml/min); lähteen lämpötila 150 °C. Seuratut ionit olivat: m/z 399, 379 ja 439 amfetamiini-d11:lle ja m/z 388, 368 ja 428 amfetamiinille; (EMV kasvoi 400 V:lla) m/z 407, 387 ja 447 metamfetamiini-d5:lle ja m/z 402, 382 ja 442 metamfetamiinille. Negatiivisen ionien kemiallisen ionisoinnin mahdollistama lisääntynyt herkkyys mahdollisti 0,2 ml:n näytekoon käyttämisen. Myöhemmässä julkaisussa, jossa kuvattiin MDMA:n metabolista profiilia sen jälkeen, kun sama kirjoittaja oli antanut huumausainetta kontrolloidussa tutkimuksessa, määrityksen perusteellinen validointi oli myös kuvattu. Toisessa NICI:tä käyttävässä menettelyssä Leis et al. kuvasivat myös menetelmän amfetamiinin enantiomeerien kvantitatiiviseen analyysiin ihmisen plasmasta GC/negatiivisen ionin kemiallisen ionisaation MS-menetelmällä. Menetelmä oli lineaarinen alueella 0,006-50 ng/ml. Sen jälkeen, kun 1 ml plasmaa oli uutettu yksinkertaisella nesteuutolla ja derivatisoitu (S)-heptafluorobutyrylprolyylikloridilla, käytettiin seuraavia GC-olosuhteita: SGE-BPX5 fused-silica-kapillaarikolonni (15 m × 0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injektori 280 °C, kolonnin lämpötila oli 100 °C 1 minuutin ajan, minkä jälkeen lämpötilaa nostettiin 40 °C/min 180 °C:een, 5 °C/min 180-195 °C:sta, 40 °C/min 310 °C:een 2 minuutin ajan, siirtolinja 315 °C:een. Kemiallinen ionisointi suoritettiin metaanilla, jonka emissiovirta oli 300 mA. Tässä farmakokineettisessä tutkimuksessa seuratut ionit olivat m/z 368,1 ja 373,1 amfetamiinille ja sisäiselle standardille.

MDMA:n ja siihen liittyvien regioisomeerien analyysi on kuvattu useiden kirjoittajien toimesta, mikä auttaa varmistamaan, että nämä läheisesti sukua olevat yhdisteet voidaan helposti erottaa toisistaan . Molemmat ryhmät kuvaavat näiden analyyttien massaspektriominaisuuksien yhdistelmää ja erityisesti kromatografista käyttäytymistä suhteessa niiden merkitykseen näiden yhdisteiden asianmukaisen tunnistamisen kannalta. Optimointi osoitti, että hyvin hitaat ohjelmointinopeudet antoivat parhaan erotuksen ei-polaarisilla stationaarifaaseilla, mutta yli 85 minuutin ajoaika oli epäkäytännöllinen. Kapillaarikolonnien kapillaarikolonnien käyttö samoilla faaseilla paransi analyysiaikaa noin puoleen tuntiin niiden paremman erotuskyvyn ansiosta. Polaarisen stationäärifaasikolonnin DB-35MS:n optimointi mahdollisti MDMA:n 10 sivuketju- ja rengasregioisomeerin erottamisen noin 4,5 minuutissa.