3.4.4.2 Kiral gaskromatografi

Separation af enantiomere af amfetamin, methamfetamin, MDA, MDMA og MDEA ved GC ved hjælp af forskellige stationære faser er blevet beskrevet. Separation af l-TPC-derivaterne blev beskrevet på DB-1 (tværbunden methylsilikone) og DB-17 (50% phenylmethylsilikone) tilsvarende GC-søjler. GC-betingelserne for DB-17-søjlen var en indledende ovntemperatur på 120-210 °C ved 30 °C/min, derefter til 260 °C ved 6 °C/min og holdt i 1 min. Ved anvendelse af DB-1-kolonnen var betingelserne 130°C til 190°C ved 4°C/min, derefter til 250°C ved 25°C/min og holdt i 2 min. I begge tilfælde var temperaturen i injektionsporten og grænsefladen 270°C. Følgende ioner blev overvåget: m/z 237 for amfetamin og MDA, m/z 241 for amfetamin-D5 og MDA-D5, m/z 251 for methamfetamin og MDMA, m/z 255 for methamfetamin-D5 og MDMA-D5, m/z 265 for MDEA og m/z 270 for MDEA-D5. Metoden kan anvendes til at adskille og identificere enantiomererne af hver af analyterne ved koncentrationer fra 5 til 10 000 ng/mL over hele området (0-100 %) for hver enantiomer. Alle enantiomertoppe blev let adskilt på basislinjen på DB-1-søjlen, men på DB-17-søjlen blev d-enantiomerne af MDMA og MDEA ikke opløst. Selv om dette ville være et problem med mange GC-detektorer, var massespektrometeret let i stand til selektivt at overvåge de unikke ioner for hver af analyterne og skelne dem fra hinanden. Desuden er det usandsynligt at finde både MDMA og MDEA misbrugt på samme tid, og derfor er sandsynligheden for, at en prøve har begge forbindelser i sig, lille. I beskrivelsen af analysen af MDEA-enantiomerer angav Paul et al. et problem med fælles ioninterferens, som forhindrede brugen af mere end en enkelt ion for den pågældende analysand på trods af brugen af et andet derivatiseringsreagens og GC-betingelser.

Andre forskere har også rapporteret enantiomerseparation ved hjælp af chirale prolylderivater .

Fallon et al. rapporterede den enantiomere disposition af MDMA og metabolitter efter indgivelse af MDMA (40 mg) til otte raske frivillige efterfulgt af indsamling af urin- og plasmaprøver. Efter ekstraktion blev stofferne derivatiseret med MTPA og kromatograferet på en DB-17-kolonne ved 50°C i 2 min til 250°C ved 25°C/min og derefter til 290°C ved 2°C/min med NPD til detektion. Plasmaprøverne blev ekstraheret, derivatiseret og kromatograferet på en DB-1-ækvivalent (HP ultra 1)-kolonne ved 100°C i 3 min til 285°C ved 15°C/min og holdt i 5 min og analyseret ved MS. Ioner ved m/z 119, 139, 162, 189, 189, 260 for amfetamin, 135, 162, 189, 260 for MDA, 135, 162, 189, 260 for MDMA blev anvendt til at påvise de pågældende forbindelser. Kvantitativ bestemmelse blev foretaget ved hjælp af m/z 162 for stofferne og m/z 148 for den interne standard methoxyphenamin. Assayet viste tæt overensstemmelse mellem den faktiske og målte enantiomersammensætning ved tre forskellige koncentrationer og fire forskellige forhold.

MTPA blev anvendt af en række andre forfattere (som tidligere nævnt) til analyse af amfetamin og beslægtede forbindelser. Ved hjælp af en DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) og GC-betingelser på: temperatur i injektorporten 140°C. Den indledende ovntemperatur blev indstillet til 140 °C i 0,5 min, derefter til 215 °C ved 15 °C/min og derefter til 285 °C ved 35 °C/min og holdt i 1 min. Overføringslinjetemperaturen blev holdt på 280 °C. Denne metode blev anvendt til adskillelse af amfetamin- og methamfetamin-enantiomere . Methamfetamin-enantiomererne blev adskilt med 0,07 min. ved en retentionstid på >7 min., hvorved enantiomererne lå inden for 1% af hinanden, hvilket er et almindeligt krav for acceptabel variation i retentionstiden i en analysekørsel. Da begge enantiomerer eluerer tæt på hinanden, er det vigtigt at vurdere omhyggeligt, hvilken enantiomer-top der evalueres af instrumentets datasystem. Proceduren gav relative standardafvigelser ved tre forskellige koncentrationer (500, 2000 og 4000 ng/mL) på 0,4-7,2 % for amfetamin og fra 0,5 til 4,0 % for methamfetamin. Assayet, der anvender en 1/X-vægtet regression, gav et lineært interval på 25-10 000 ng/mL. En lignende procedure blev beskrevet til analyse af MTPA-derivateret amfetamin, methamfetamin, MDA, MDMA og MDEA på en 5% phenylpolysiloxankapillærsøjle (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) under anvendelse af følgende GC-betingelser: Ovntemperaturen blev øget fra 140 °C i 0,5 min til 215 °C ved 15 °C/min i 1,5 min til 285 °C ved 35 °C/min, hvor den blev holdt i 1,0 min. Injektor- og overføringslinjetemperaturerne var henholdsvis 160°C og 260°C . Testen gav et lineært interval på 25-5 000 ng/mL for MDEA og 25-10 000 ng/mL for amfetamin, methamfetamin, MDA og MDMA. Variationen ved cutoff-koncentrationen (500 ng/mL) var inden for ±11% for alle analyter.

Peters et al. beskrev et negativt ioniseret kemisk ionisering GC-MS assay til bestemmelse af amfetamin- og methamfetamin-enantiomerer i plasma eller serum. Enantiomerne blev derivatiseret med S-heptafluorobutyrylprolylchlorid og separeret ved hjælp af en GC. Metoden var lineær fra 5 til 250 μg/L med en ekstraktionseffektivitet på 88,9-98,6 % ved hjælp af en simpel ekstraktion i fast fase. GC-betingelserne var som følger: 5 % phenylmethylsiloxankolonne (HP-5MS; 30 m×0,25 mm i.d.); temperatur i injektionsporten 280 °C; kolonnetemperatur 100 °C, øget til 180 °C ved 30 °C/min, til 230 °C ved 5 °C/min og til 310 °C ved 30 °C/min; overførselsledning 280 °C; NICI, methan (2 mL/min); kildetemperatur 150 °C. Følgende ioner blev overvåget: m/z 399, 379 og 439 for amfetamin-d11 og m/z 388, 368 og 428 for amfetamin; (EMV forøget med 400 V) m/z 407, 387 og 447 for methamfetamin-d5 og m/z 402, 382 og 442 for methamfetamin. Den øgede følsomhed, der opnås ved kemisk ionisering med negative ioner, har gjort det muligt at anvende en prøvestørrelse på 0,2 mL. I en efterfølgende publikation, der beskriver MDMA’s metaboliske profil efter indgivelse af stoffet i en kontrolleret undersøgelse af den samme forfatter, blev der også beskrevet en grundig validering af assayet . I en anden procedure med anvendelse af NICI beskrev Leis et al. også en metode til kvantitativ analyse af amfetamin-enantiomerer i humant plasma ved GC/negativ ion kemisk ionisering MS. Metoden var lineær inden for et område på 0,006-50 ng/mL. Efter en simpel væskeekstraktion af 1 mL plasma og derivatisering med (S)-heptafluorobutyrylprolylchlorid blev der anvendt følgende GC-betingelser: SGE-BPX5 fused-silica kapillærsøjle (15 m×0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injektor 280°C, søjletemperaturen var 100°C i 1 min, efterfulgt af en stigning på 40°C/min til 180°C, 5°C/min fra 180-195°C, 40°C/min til 310°C i 2 min, overføringslinje 315°C. Den kemiske ionisering blev udført med methan med en emissionsstrøm på 300 mA. Ioner overvåget til denne farmakokinetiske undersøgelse var m/z 368,1 og 373,1 for henholdsvis amfetamin og intern standard.

Analyse af MDMA og relaterede regioisomerer er blevet beskrevet af flere forfattere, hvilket bidrager til at sikre, at disse nært beslægtede forbindelser let kan differentieres. Kombinationen af massespektrale egenskaber og især den kromatografiske opførsel af disse analyter er beskrevet af begge grupper i forhold til deres betydning for en korrekt identifikation af disse forbindelser. Optimering viste, at meget langsomme programhastigheder gav den bedste separation på upolære stationære faser, men at en løbetid på over 85 minutter var upraktisk. Anvendelse af kapillærsøjler med smal boring med de samme faser forbedrede analysetiden til ca. en halv time på grund af deres forbedrede opløsningsevne. Optimering af en DB-35MS, en polær stationærfasesøjle, muliggjorde opløsning af 10 sidekæde- og ringregioisomerer af MDMA på ca. 4,5 min .