Abstract

Melioidózu a vozhřivku způsobují blízce příbuzné druhy Burkholderia pseudomallei a Burkholderia mallei. Zatímco melioidóza je významnou příčinou nemocnosti v jihovýchodní Asii, vozhřivka je velmi vzácná. Účinnost ciprofloxacinu a doxycyklinu byla hodnocena proti kmeni B. pseudomallei a kmeni B. mallei, které byly citlivé na obě antimikrobiální látky in vitro. Portonským outbredním myším a syrským křečkům bylo podáváno 40 mg/kg doxycyklinu nebo ciprofloxacinu dvakrát denně sc injekcí podle jednoho ze tří režimů: dávkování začínající 48 h před výzvou a pokračující 5 dní po výzvě; 5denní léčba začínající ihned po výzvě; 5denní léčba začínající 24 h po výzvě. Myši byly napadeny ip B. pseudomallei 4845 a křečci byli napadeni ip B. mallei 23344. Antimikrobiální účinnost byla stanovena na základě posunu mediánu letální dávky (MLD). Profylaxe ciprofloxacinem i okamžitá terapie zvýšily MLD B. pseudomallei na 4 × 106 cfu z 19 cfu u neléčených zvířat, ale terapeutický ciprofloxacin zvýšil MLD pouze na 180 cfu. Výsledky pro doxycyklin byly podobné. Profylaxe ciprofloxacinem zvýšila MLD B. mallei 23344 na 4,6 × 105 KTJ ve srovnání se 4 KTJ u neléčených kontrol. Okamžitá terapie zvýšila MLD na 7,0 × 104 KTJ a terapie zvýšila MLD na 1,6 × 103 KTJ. Všechny režimy doxycyklinu chránily křečky před výzvami až do 2 × 107 KTJ. Navzdory použití citlivého kmene B. pseudomallei nebyla žádná z antimikrobiálních látek při terapeutickém použití účinná. Včasné podání obou antimikrobiálních látek však bylo účinné při prevenci symptomatické infekce. Doxycyklin byl lepší z obou antimikrobiálních látek proti experimentální vozhřivce, ačkoli u léčených zvířat došlo k recidivě přibližně 4-5 týdnů po vyvolání.“

Úvod

Melioidózu a vozhřivku způsobují blízce příbuzné druhy Burkholderia pseudomallei a Burkholderia mallei. Zatímco melioidóza je významnou příčinou úmrtnosti a nemocnosti v jihovýchodní Asii, severní Austrálii a na indickém subkontinentu, vozhřivka je velmi vzácná a obecně se omezuje na onemocnění koní v některých částech Blízkého východu, Asie a Jižní Ameriky.1,2

V důsledku toho byla citlivost B. pseudomallei na antimikrobiální látky podrobně zkoumána3-5 a antimikrobiální terapie melioidózy je dobře zavedena.5,6 Použití fluorochinolonů k léčbě melioidózy bylo obecně vyloučeno z důvodu vysokých MIC in vitro u některých kmenů B. pseudomallei, které přesahují hodnoty, jichž lze dosáhnout v séru.4,5 Navzdory této kontraindikaci7,8 se při léčbě melioidózy používá ciprofloxacin, ať už samostatně nebo v kombinaci, a to na základě toho, že ciprofloxacin může pronikat do fagocytárních buněk, v nichž se B. pseudomallei zdržuje, a dosahovat tak koncentrací 4-12krát vyšších, než je extracelulární koncentrace.9,10 Při sérových koncentracích 2-3 mg/l dosažitelných při standardním perorálním dávkování by tedy teoreticky mělo být dosaženo intracelulárních koncentrací až 20 mg/l.11 Kromě toho lze dosáhnout sérových koncentrací 9 mg/l i.v. infuzí, i když krátkodobě.11 Druhá úvaha spočívá v tom, že fluorochinolony mohou být užitečné pro okamžitou léčbu nebo jako profylaxe u osob, o nichž je známo, že byly vystaveny melioidóze, nebo u nichž existuje vysoké riziko expozice, zejména proto, že v současné době neexistuje žádný prostředek imunoprofylaxe.

Nedostatek vozhřivek v druhé polovině tohoto století znamená, že o antimikrobiální citlivosti B. mallei, zejména k moderním antimikrobiálním látkám, existuje jen málo znalostí, přičemž těch několik málo odkazů v recentní mikrobiologické literatuře pochází převážně z ruských zdrojů.12-18 Stejně tak není dobře známa účinnost moderních antimikrobiálních látek in vivo. Nedávné studie naznačují, že citlivost B. mallei k ciprofloxacinu je podobná citlivosti B. pseudomallei in vitro.19 Kromě toho jsou si B. pseudomallei a B. mallei velmi podobné, pokud jde o jejich antigenicitu, biochemii a velmi pravděpodobně i patogenitu, zejména s ohledem na intracelulární přežívání.20 Argumenty podporující použití ciprofloxacinu u melioidózy by tedy platily i pro vozhřivku, ale zároveň je třeba vzít v úvahu jeho špatnou účinnost v klinických studiích.

Doxycyklin se používá samostatně při léčbě lokalizované melioidózy a v kombinaci s jinými antimikrobiálními látkami5 při systémovém onemocnění, může tedy mít určitou užitečnost jako profylaktická nebo okamžitá léčba melioidózy. Navíc stejně jako ciprofloxacin může pronikat intracelulárně a je účinný proti široké škále intracelulárních patogenů.21 V předchozích experimentech doxycyklin vykazoval dobrou in vitro aktivitu proti B. mallei.19

Účinnost profylaxe a okamžité terapie ciprofloxacinem a doxycyklinem byla měřena proti experimentální melioidóze na myším modelu a experimentální motolici na modelu křečka.

Materiály a metody

Kmen, skladování a kultivace

Oba organismy jsou Poradním výborem pro nebezpečné patogeny (ACDP) klasifikovány jako patogeny kategorie 3, proto byly všechny bakteriologické postupy prováděny v bezpečnostních skříních třídy 3 odpovídajících normě BS5726.

Jako provokační kmeny pro melioidózu byly použity kmeny B. pseudomallei NCTC 4845 a B. mallei ATCC 23344. Oba druhy byly skladovány při teplotě -80 °C v systému pro skladování kuliček „Protect“ (TSC Ltd, Heywood, Lancashire, Velká Británie), dokud nebylo potřeba. Výzkumné kultury a počty byly kultivovány na živném agaru nebo živném bujónu a studie antimikrobiální citlivosti in vitro byly provedeny s použitím Mueller-Hintonova bujónu.

Příprava antimikrobiálních látek

Pro pokusy in vitro byly prášky doxycyklinu (Sigma, Poole, UK) a ciprofloxacinu (Bayer, Newbury, UK) rozpuštěny v deionizované vodě, aby vznikly zásobní roztoky o koncentraci 10 mg/l. Roztok byl rozpuštěn v deionizované vodě. Roztoky pro podávání se připravovaly každý den čerstvé rozpuštěním prášku doxycyklinu ve fosfátovém pufrovaném roztoku a tablet ciproxinu (Bayer) v deionizované vodě a následnou filtrační sterilizací roztoků.

In vitro testování antimikrobiální citlivosti

Bakterie byly získány vložením pěti až šesti kuliček „Protect“ do Mueller-Hintonova bujónu (Oxoid, Basingstoke, UK) a statickou inkubací kultur při 37 °C po dobu 24 h pro B. pseudomallei a 48 h pro B. mallei. Byla použita metoda ředění mikrotitračních destiček v souladu s pokyny NCCLS.22 Stručně řečeno, 96jamkové mikrotitrační destičky obsahující jednotlivé antimikrobiální látky v ředění od 0,063 mg/l do 64 mg/l byly připraveny předem a uloženy při -20 °C. Do všech jamek bylo přidáno inokulum přibližně 5 × 105 KTJ/ml (stanoveno pomocí McFarlandova standardu 5) ve 100 μl z jednodenních nebo 48hodinových kultur v Muellerově-Hintonově bujónu. Destičky byly inkubovány při 37 °C po dobu 18-20 h. Vzhledem k pomalému růstu B. mallei bylo nutné před odečtením MIC inkubovat destičky po dobu 36 h.

Jako standardy kontroly kvality byly použity Escherichia coli ATCC 25922 a Staphylococcus aureus ATCC 29213 (NCIMB, Aberdeen, UK).

Zvířecí modely

Všechny studie na zvířatech byly provedeny v souladu se zákonem o vědeckých postupech (zvířata) z roku 1986 a s Pravidly pro držení zvířat a péči o ně používanými při vědeckých postupech z roku 1989.

Pro experimentální melioidózu a žloutenku byly použity samice myší Porton outbred (chované ve vlastní režii) a syrští křečci kmene Lakeview (Charles River, Margate, UK). Myši byly chovány v klecích po pěti zvířatech a křečci v párech v pevnostěnném polostěnném izolátoru odpovídajícím normě BS5726. Byli vystaveni 12hodinovému cyklu světlo – tma a měli volný přístup k potravě a vodě. Myši i křečci dostávali komerční krmivo pro hlodavce, křečci navíc jednou týdně dostávali přídavky slunečnicových semen.

V předchozích studiích poskytovaly nitrilové gumové rukavice nošené v polokombinéze dostatečnou ochranu proti náhodnému pokousání myší během chovu a procedur. Přestože je kmen syrských křečků Lakeview známý svou učenlivostí, při manipulaci s infikovanými křečky byly jako preventivní opatření přes nitrilové gumové rukavice nošeny průmyslové kevlarové rukavice odolné proti propíchnutí.

Podávání antimikrobiálních látek

Obě antimikrobiální látky byly použity v dávce 40 mg/kg tělesné hmotnosti, podávané dvakrát denně v intervalu 12 hodin sc injekcí v 0,1 ml u myší a v 0,1 ml u myší.2 ml u křečků podle jednoho ze tří režimů: profylaktický režim, kdy byla antimikrobiální léčba zahájena 48 h před výzvou a pokračovala 5 dní po výzvě; okamžitá nebo supresivní léčba s antimikrobiálními látkami podanými bezprostředně po výzvě a pokračujícími 5 dní; a terapeutický režim sestávající z 5denního podávání antimikrobiálních látek začínajícího 24 h po výzvě.

Dvěma dalším skupinám myší napadených B. pseudomallei byl podán profylaktický režim, jak je popsán, s tím rozdílem, že antibiotika byla podávána ještě 10 dní po napadení.

Vyvolání zvířat a odhad virulence

Virulence každého patogenu byla stanovena měřením mediánu letální dávky (MLD), definované jako dávka potřebná k usmrcení 50 % malé populace zvířat (25-30), vypočtené podle metody Reeda & Muencha23. Antimikrobiální účinnost byla měřena porovnáním MLD u ošetřených zvířat s MLD u neošetřených kontrol.

Vyzývací kultury B. pseudomallei a B. mallei byly připraveny obnovením příslušných kuliček „Protect“ do živného bujónu a inkubací po dobu 24, resp. 48 hodin.

Myši ve skupinách po pěti byly napadeny 0,1 ml sériového ředění suspenze B. pseudomallei ip injekcí a pozorovány 35 dní po napadení. Křečci, ve skupinách po čtyřech, byli napadeni 0,2 ml sériového ředění suspenze B. mallei cestou ip a byli pozorováni 23 dní po napadení. Osm křečků, kterým byla podána okamžitá léčba doxycyklinem, a osm křečků, kterým byla podána 24hodinová léčba doxycyklinem, bylo ponecháno 5 týdnů po výzvě pro další studie. V obou zvířecích modelech byly profylaktické skupiny vystaveny výzvě přibližně v polovině období mezi dávkami antimikrobiálních látek.

Po charakterizaci příznaků a symptomů každé z infekcí byly všude, kde to bylo možné, pozorovány humánní koncové body. Pitvy byly prováděny v izolátoru. Orgány byly rozpůleny a rozetřeny na živný agar, který byl inkubován 24 h, resp. 48 h při 37 °C pro B. pseudomallei a B. mallei. Identifikace kolonií rostoucích na plotnách byla potvrzena polymerázovou řetězovou reakcí (PCR).

PCR

Jednotlivé kolonie byly nabrány do 200 μl deionizované vody a vařeny 5 min. DNA byla amplifikována pomocí oligonukleotidových primerů komplementárních ke genům kódujícím 16S rRNA B. pseudomallei a B. mallei. PCR amplifikace byla provedena přidáním 18 μl následující směsi: 1 × PCR pufr (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Německo); 0.2 mM PCR nukleotidové směsi (Boehringer-Mannheim), 180 ng 3′ i 5′ oligonukleotidových primerů, 5 % (v/v) dimethylsulfoxidu (DMSO) a 0,5 U Taq polymerázy (Boehringer-Mannheim) ke 2 μl suspenze kolonií. Amplifikace byla provedena v termálním cykleru Perkin-Elmer (Perkin-Elmer Cetus, Warrington, UK) za následujících podmínek: 30 cyklů při 95 °C po dobu 30 s, 50 °C po dobu 1 min a 72 °C po dobu 1 min s následnou 10minutovou extenzí při 72 °C. Produkty PCR byly analyzovány elektroforézou v agarózovém gelu a pás produktů byl vizualizován barvením ethidium bromidem na 2% TAE (40 mM tris-acetát, 1 mM EDTA) gelu.

Výsledky

Citlivost in vitro

B. pseudomallei 4845 i B. mallei 23344 byly in vitro citlivé nebo středně citlivé na ciprofloxacin a doxycyklin, přičemž B. pseudomallei inhibovala 2.0 mg/l ciprofloxacinu a 1 mg/l doxycyklinu a B. mallei byla inhibována 1,0 mg/l ciprofloxacinu a 0,25 mg/l doxycyklinu.

In vivo byla citlivost B. pseudomallei

Kontrolní myši byly intraperitoneálně vystaveny sérii logaritmických ředění v rozsahu od 0,3 cfu do 2,9 × 103 cfu B. pseudomallei, což vedlo k diseminované a rychle smrtelné infekci. Zvířata onemocněla během 24-48 hodin po výzvě, což se projevilo nespecifickými příznaky, jako je piloerekce, přičemž zvířata, kterým byly podány vyšší koncentrace B. pseudomallei, podlehla během 96 hodin po výzvě. Pitva odhalila jen velmi málo hrubých změn, ačkoli bakterie mohly být izolovány z jater, sleziny, plic a krve. U zvířat, která podlehla později, se objevila výrazná splenomegalie a příležitostně hepatomegalie. Ve slezině a slinivce břišní se vytvořily četné malé abscesy, méně často v játrech. MLD klesl na 111 KTJ během 7 dnů po napadení a dále klesal v průběhu 3 týdnů až na konečnou MLD 20 KTJ (obrázky 1 a 2). Pitva přeživších zvířat neodhalila žádné hrubé změny a orgány byly bez B. pseudomallei.

Ošetřené myši byly vystaveny sérii logaritmických ředění v rozmezí od 180 KTJ do 1,8 × 107 KTJ B. pseudomallei. Mezi účinností obou antimikrobiálních látek byl malý rozdíl. Profylaktické nebo okamžité použití obou látek chránilo před 1 × 107 cfu bakterií, zatímco byla podávána antimikrobiální látka. U několika zvířat došlo v průběhu 5 týdnů k recidivě, k níž došlo nejdramatičtěji ve skupině s doxycyklinovou profylaxí, a to mezi 11. a 21. dnem po výzvě. Na konci pokusu však byly MLD podstatně vyšší než u kontrol, pohybovaly se mezi 1,4 × 106 KTJ a 4,6 × 106 KTJ (obrázky 1 a 2). Pitva přeživších zvířat odhalila u menšiny zvířat splenomegalii, i když ne v takové míře jako u kontrol, a v některých případech byly přítomny abscesy. B. pseudomallei bylo možné izolovat z orgánů některých zvířat, včetně těch bez zjevných hrubých změn.

Léčebné použití obou antimikrobiálních látek zpozdilo průběh infekce, ale po dobu 5 týdnů poskytovalo minimální ochranu s konečnou MLD pro ciprofloxacin 180 KTJ a pro doxycyklin 640 KTJ (obrázky 1 a 2).

In vivo citlivost B. mallei

Hamsterům byla intraperitoneálně podána série logaritmických ředění v rozsahu od 0,3 cfu do 2,9 × 107 cfu B. mallei. Infekce měla velmi rychlý průběh charakterizovaný výraznými příznaky. Během 24-48 hodin byla zvířata utlumená a méně aktivní. Prvním příznakem onemocnění byl vodnatý výtok z očí, který se změnil v hnisavý. Pozdějšími příznaky byly otoky končetin a hmatné krepitace pohrudnice. Ke všem úhynům/humánním koncům došlo do 7 dnů po infekci (obrázek 3). Pitva odhalila jen málo změn, dominantním znakem byla splenomegalie, příležitostně se objevily abscesy ve slezině i pankreatu.

Profylaktická léčba ciprofloxacinem a okamžitá léčba ciprofloxacinem chránila zvířata před výzvou až 2,9 × 107 KTJ po dobu 18 dnů, po níž následoval náhlý relaps, který vedl k poklesu MLD na 4,6 × 105 KTJ a 7 × 104 KTJ na konci pokusu (obrázek 3). Pitva uhynulých zvířat odhalila zvětšenou slezinu obsahující jeden nebo dva velké abscesy. Pitva přeživších zvířat obecně odhalila splenomegalii s příležitostným abscesem, z něhož bylo možné izolovat B. mallei.

Když byla zahájena léčba ciprofloxacinem, projevily se u osmi zvířat s nejvyššími nároky příznaky onemocnění. U dvou zvířat došlo ke zhoršení stavu navzdory léčbě, tři zvířata zůstala stabilní bez dalšího zhoršení, ale bez výrazného zlepšení a u tří zvířat došlo ke zlepšení. S výjimkou dvou prvních případů zvířata přežila výzvy až 2,9 × 107 KTJ po dobu 11 dnů. U zvířat, u nichž se projevilo symptomatické onemocnění, došlo zpočátku k relapsům mezi 11. a 18. dnem. Relapsy u skupin s nižšími výzvami se vyskytovaly od 18. dne do konce pokusu a konečná MLD ve 23. dni po výzvě byla 1,6 × 103 KTJ (obrázek 3). Pitevní nálezy uhynulých a přeživších zvířat byly shodné s nálezy u ostatních režimů.

Všechny režimy doxycyklinu chránily křečky před výzvami až do 2,9 × 107 cfu, přičemž během 23denního experimentálního období nebyly pozorovány žádné relapsy, včetně zlepšení u osmi symptomatických křečků v terapeutické skupině. Pitva přeživších zvířat odhalila u některých zvířat splenomegalii, ačkoli u nich nebyla nalezena žádná B. mallei.

U zvířat, která byla zachována, však došlo k relapsu, přičemž onemocnění se znovu objevilo u čtyř z osmi křečků, kterým byla podána okamžitá terapie, a u jednoho zvířete, které dostalo terapeutický režim 28-31 dní po výzvě. Pitvy odhalily četné abscesy ve slezině, játrech a slinivce břišní, z nichž byla izolována B. mallei.

Diskuse

B. pseudomallei i B. mallei podané intraperitoneálně způsobily na příslušných zvířecích modelech rychle invazivní a smrtelnou infekci reprodukující fulminantní systémovou infekci podobnou té, která se vyskytuje u lidské melioidózy a vozhřivky. Melioidóza a vozhřivka však mají jiné klinické projevy, včetně chronické abscesové infekce nebo klidové infekce, která může trvat několik let, než se projeví symptomy.2,24,25 Zvířecí modely, o nichž se zde píše, lze upravit tak, aby reprodukovaly chronické infekce. V případě experimentální melioidózy může u některých zvířat dojít k chronické abscesové infekci u myší po subkutánní výzvě nebo při použití různých myších kmenů, jako jsou inbrední kmeny C57B6 nebo outbrední kmeny Swiss-Webster (nepublikované údaje). Infekce B. mallei u invazivních myší Balb/C, C57B6 a Swiss-Webster vede k chronickému, neletálnímu onemocnění a chronickému, fatálnímu onemocnění s vysokou MLD u outbredních myší Porton (nepublikované údaje). V těchto pokusech byl zajímavý akutní model, který pravděpodobně představuje „horší případ“ infekce, který, pokud se mu zabrání ciprofloxacinem nebo doxycyklinem, může také potlačit vznik chronického onemocnění. Kromě toho se mnoho případů melioidózy projevuje jako akutní onemocnění, ačkoli může být nejasné, zda se jedná o nedávnou infekci nebo o akutní „krizi“ u pacientů, kteří mohli dlouhou dobu přechovávat subklinické infekce.

Zajímavým rysem onemocnění na zvířecích modelech bylo zapojení slinivky břišní jako místa vzniku abscesů, což bylo zvláště patrné na modelu křečka. Jak u B. pseudomallei, tak u B. cepacia byla zaznamenána vazba s inzulinem26 , což může naznačovat schopnost vázat se na inzulinové receptory, což by vysvětlovalo postižení pankreatu. Kromě toho je diabetes mellitus běžným predispozičním faktorem lidského onemocnění, ačkoli v některých případech chronického onemocnění není jasné, zda B. pseudomallei způsobuje diabetes, nebo základní diabetes vede k symptomatickému onemocnění. Onemocnění slinivky břišní u lidské melioidózy je však vzácné5 a jeho význam u vozhřivky není znám.

Bylo zjištěno, že ciprofloxacin a doxycyklin jsou v léčbě melioidózy u lidí horší než ostatní antimikrobiální látky samotné nebo v kombinaci a jsou spojeny s vysokým počtem relapsů.7,8 Klinické nálezy odrážely výsledky pozorované v terapeutických skupinách v těchto studiích i v případě, že experimentální kmen byl citlivý nebo středně citlivý na jednotlivé antimikrobiální látky a sérové a tkáňové hladiny antimikrobiální látky přesahovaly MIC in vitro. MIC ciprofloxacinu proti B. pseudomallei 4845 byla typická pro 50 % kmenů B. pseudomallei testovaných v širší studii provedené v naší laboratoři19 , ale nízká ve srovnání s jinými studiemi.3,4 MIC doxycyklinu byla nejvyšší naměřená pro všechny kmeny B. pseudomallei testované v laboratoři19 , ale opět nízká ve srovnání s jinými studiemi.5 Profylaktické a okamžité postexpoziční použití ciprofloxacinu nebo doxycyklinu poskytlo dobrou ochranu, ačkoli možnost profylaxe nebo okamžité terapie v klinických případech by byla omezena na situace, jako jsou laboratorní nehody nebo preventivní okamžitá terapie po traumatickém poranění v endemických oblastech. Experimenty ukázaly, že „okno příležitosti“, tj. doba mezi expozicí patogenu a úspěšnou prevencí infekce antimikrobiálními látkami, je kratší než 24 h po provokaci.

U skupin s profylaktickou a okamžitou terapií se vyskytly některé recidivy, což lze přičíst řadě faktorů; především tomu, že doba podávání antimikrobiálních látek byla krátká, ačkoli z klinického hlediska by se režim v případě použití profylaxe prodloužil. Důležitá by byla také srovnávací farmakokinetika jednotlivých antimikrobiálních látek vzhledem k MIC in vitro a schopnost bakterií zdržovat se v privilegovaných intracelulárních místech, která mohou být pro antimikrobiální látky nepřístupná.

Prodloužení podávání doxycyklinu na 10 dní po výzvě zabránilo recidivě (k úmrtím docházelo i během doby podávání), ale prodloužení podávání ciprofloxacinu zvýšilo počet recidiv. Farmakokinetika doxycyklinu byla lepší, pokud jde o eradikaci B. pseudomallei ve srovnání s ciprofloxacinem. Doxycyklin dosahoval maximální sérové koncentrace 3,7 mg/l a sérová koncentrace přesahovala MIC po dobu 24 hodin po podání dávky. Vrcholová koncentrace ve slezině byla 4,1 mg/kg s hladinou přesahující 1 mg/kg po dobu 9 h. Vrcholová koncentrace ciprofloxacinu v séru byla 2,9 mg/l s překročením MIC pouze po dobu 1 h po podání a vrcholová koncentrace ve slezině byla 10,3 mg/kg a zůstala nad 2 mg/kg po dobu 3 h (nepublikované údaje). Navzdory příznivé farmakokinetice se B. pseudomallei obnovila u přeživších zvířat ze všech skupin, včetně těch, kterým byly antimikrobiální látky podávány po dobu 10 dnů. Potenciál recidivy představovaný těmito přežívajícími bakteriemi je z těchto experimentů obtížné předpovědět.

Podobnosti ve farmakokinetice obou antimikrobiálních látek u křečků vysvětlovaly rozdíly mezi účinností doxycyklinu a ciprofloxacinu proti B. mallei. Použitý kmen byl citlivý na obě antimikrobiální látky, MIC pro ciprofloxacin byla typická pro 50 % testovaných kmenů, ačkoli MIC pro doxycyklin byla jedna z nejnižších. Maximální koncentrace ciprofloxacinu v séru křečka byly 2,3 mg/l, přičemž MIC byla překročena pouze po dobu 1 h. Koncentrace ve slezině dosáhly maxima 20 mg/kg a zůstaly vyšší než 1 mg/kg po dobu nejméně 12 h. Sérové koncentrace doxycyklinu dosáhly 2,6 mg/l a zůstaly vyšší než 0,25 mg/l po dobu nejméně 12 h. Koncentrace ve slezině dosáhly 8,7 mg/kg a zůstaly vyšší než 0,25 mg/kg po dobu nejméně 12 h (nepublikované údaje). Vzhledem k tomu, že vozhřivka je tak vzácné onemocnění, nebyly patogenetické mechanismy a faktory virulence B. mallei podrobeny takovému zkoumání jako u B. pseudomallei. Podobnosti mezi oběma organismy se však pravděpodobně vztahují i na intracelulární penetraci a přežívání, což by vysvětlovalo recidivu. Vzhledem k těmto podobnostem slouží klinické zkušenosti s léčbou melioidózy jako varování pro potenciální antimikrobiální režimy proti vozhřivce, zejména proto, že navzdory příznivé farmakokinetice a zdánlivé citlivosti může stále docházet k recidivám infekce.

V těchto pokusech prokázaly obě antimikrobiální látky určitou užitečnost pro profylaxi melioidózy, ale nebyly vhodné pro terapeutické použití, což odráží klinické poznatky. Potenciálně by mohl být doxycyklin použit pro prevenci a léčbu vozhřivky, ačkoli problémy, které se vyskytly při léčbě melioidózy, se mohou týkat i vozhřivky.

Abstrakt byl poprvé přečten na Mezinárodním kongresu o melioidóze konaném v Bangkoku, Thajsko, 22.-25. listopadu 1998.

.