3.4.2 Chirální plynová chromatografie
Byla popsána separace enantiomerů amfetaminu, metamfetaminu, MDA, MDMA a MDEA pomocí GC s použitím různých stacionárních fází . Separace derivátů l-TPC byla popsána na GC kolonách ekvivalentních DB-1 (zesíťovaný methylsilikon) a DB-17 (50% fenylmethylsilikon). Podmínky GC pro kolonu DB-17 byly počáteční teplota pece 120-210 °C při 30 °C/min, poté 260 °C při 6 °C/min a udržování po dobu 1 min. Při použití kolony DB-1 byly podmínky 130 °C až 190 °C při 4 °C/min, poté 250 °C při 25 °C/min a udržování po dobu 2 min. V obou případech byla teplota vstřikovacího portu a rozhraní 270 °C. Sledované ionty byly m/z 237 pro amfetamin a MDA, m/z 241 pro amfetamin-D5 a MDA-D5, m/z 251 pro metamfetamin a MDMA, m/z 255 pro metamfetamin-D5 a MDMA-D5, m/z 265 pro MDEA a m/z 270 pro MDEA-D5. Metodu bylo možné použít k separaci a identifikaci enantiomerů každého z analytů v koncentracích od 5 do 10 000 ng/ml v celém rozsahu (0-100 %) každého enantiomeru. Všechny píky enantiomerů byly snadno odděleny na koloně DB-1, ale na koloně DB-17 nebyly d-enantiomery MDMA a MDEA rozlišeny. Zatímco u mnoha GC detektorů by to způsobilo problém, hmotnostní spektrometr byl snadno schopen selektivně monitorovat jedinečné ionty pro každý z analytů a odlišit je od sebe. Kromě toho je nepravděpodobné, že by se našel současně zneužívaný MDMA i MDEA, proto by pravděpodobnost, že vzorek bude obsahovat obě sloučeniny, byla nízká. V popisu analýzy enantiomerů MDEA Paul et al. uvedli problém se společnou iontovou interferencí, která bránila použití více než jednoho iontu pro tento analyt, přestože bylo použito jiné derivatizační činidlo a jiné podmínky GC.
Oddělení enantiomerů pomocí chirálních prolylových derivátů uvedli i další badatelé .
Fallon a kol. uvedli enantiomerní rozložení MDMA a metabolitů po podání MDMA (40 mg) osmi zdravým dobrovolníkům s následným odběrem vzorků moči a plazmy. Po extrakci byly drogy derivatizovány pomocí MTPA a chromatografovány na koloně DB-17 při 50 °C po dobu 2 min na 250 °C při 25 °C/min a poté na 290 °C při 2 °C/min s použitím NPD pro detekci. Vzorky plazmy byly extrahovány, derivatizovány a chromatografovány na koloně DB-1 ekvivalentní (HP ultra 1) při 100 °C po dobu 3 min na 285 °C při 15 °C/min a udržovány po dobu 5 min a analyzovány pomocí MS. K detekci zájmových sloučenin byly použity ionty o m/z 119, 139, 162, 189, 260 pro amfetamin, 135, 162, 189, 260 pro MDA, 135, 162, 189, 260 pro MDMA. Kvantifikace byla provedena pomocí m/z 162 pro drogy a m/z 148 pro vnitřní standard methoxyfenamin. Analýza prokázala těsnou shodu mezi skutečným a naměřeným složením enantiomerů při třech různých koncentracích a čtyřech různých poměrech.
MTPA použila řada dalších autorů (jak bylo uvedeno výše) pro analýzu amfetaminu a příbuzných sloučenin. Při použití DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) a podmínek GC: teplota injektorového portu 140 °C. Počáteční teplota pece byla nastavena na 140 °C po dobu 0,5 min, poté na 215 °C při 15 °C/min a následně na 285 °C při 35 °C/min a udržována po dobu 1 min. Teplota přenosové linky byla udržována na 280 °C. Tato metoda byla použita pro separaci enantiomerů amfetaminu a metamfetaminu. Enantiomery metamfetaminu byly odděleny za 0,07 min při retenčním čase >7 min, čímž se enantiomery pohybovaly v rozmezí 1 %, což je běžný požadavek na přijatelnou odchylku retenčního času v rámci analytického cyklu. Protože oba enantiomery eluují blízko sebe, je důležité pečlivě vyhodnotit, který pík enantiomeru je vyhodnocován datovým systémem přístroje. Postup poskytl relativní směrodatné odchylky při třech různých koncentracích (500, 2000 a 4000 ng/ml) od 0,4 do 7,2 % pro amfetamin a od 0,5 do 4,0 % pro metamfetamin. Test s použitím vážené regrese 1/X poskytl lineární rozsah 25-10 000 ng/ml. Podobný postup byl popsán pro analýzu amfetaminu derivatizovaného MTPA, metamfetaminu, MDA, MDMA a MDEA na 5% fenyl polysiloxanové kapilární koloně (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) za použití následujících podmínek GC: Teplota v peci byla zvýšena ze 140 °C po dobu 0,5 min na 215 °C při 15 °C/min po dobu 1,5 min na 285 °C při 35 °C/min, kde byla udržována po dobu 1,0 min. Teploty injektoru a přenosové linky byly 160 °C a 260 °C. Test poskytl lineární rozsah 25-5 000 ng/ml pro MDEA a 25-10 000 ng/ml pro amfetamin, metamfetamin, MDA, MDMA. Variace při mezní koncentraci (500 ng/ml) byla u všech analytů v rozmezí ±11 %.
Peters a kol. popsali analýzu GC-MS s chemickou ionizací negativních iontů pro stanovení enantiomerů amfetaminu a metamfetaminu v plazmě nebo séru. Enantiomery byly derivatizovány S-heptafluorobutyrylprolylchloridem a separovány pomocí GC. Metoda byla lineární od 5 do 250 μg/l s účinností extrakce 88,9-98,6 % při použití jednoduché extrakce na pevné fázi. Podmínky GC byly následující: 5 % fenylmethylsiloxanová kolona (HP-5MS; 30 m × 0,25 mm i.d.); teplota injekčního portu 280 °C; teplota kolony 100 °C zvýšená na 180 °C při 30 °C/min, na 230 °C při 5 °C/min a na 310 °C při 30 °C/min, přenosová linka 280 °C; NICI, methan (2 ml/min); teplota zdroje 150 °C. Sledované ionty byly: m/z 399, 379 a 439 pro amfetamin-d11 a m/z 388, 368 a 428 pro amfetamin; (EMV zvýšená o 400 V) m/z 407, 387 a 447 pro metamfetamin-d5 a m/z 402, 382 a 442 pro metamfetamin. Zvýšená citlivost, kterou poskytuje chemická ionizace záporných iontů, umožnila použít vzorek o velikosti 0,2 ml. V následné publikaci popisující metabolický profil MDMA po podání drogy v kontrolované studii téhož autora byla rovněž vymezena důkladná validace testu . V dalším postupu využívajícím NICI Leis a kol. rovněž popsali metodu kvantitativní analýzy enantiomerů amfetaminu v lidské plazmě pomocí GC/negativní iontové chemické ionizace MS. Metoda byla lineární v rozsahu 0,006-50 ng/ml. Po jednoduché kapalinové extrakci 1 ml plazmy a derivatizaci (S)-heptafluorobutyrylprolylchloridem byly použity následující podmínky GC: SGE-BPX5 kapilární kolona z taveného oxidu křemičitého (15 m × 0,25 mm i.d.; ThermoQuest), injektor 280 °C, teplota kolony byla 100 °C po dobu 1 min, následovalo zvýšení o 40 °C/min na 180 °C, 5 °C/min od 180-195 °C, 40 °C/min na 310 °C po dobu 2 min, transferová linka 315 °C. Chemická ionizace byla provedena metanem s emisním proudem 300 mA. Ionty sledované pro tuto farmakokinetickou studii byly m/z 368,1 a 373,1 pro amfetamin a vnitřní standard, v uvedeném pořadí.
Analýza MDMA a příbuzných regioizomerů byla popsána několika autory, což pomáhá zajistit snadné rozlišení těchto blízce příbuzných sloučenin . Kombinace hmotnostních spektrálních charakteristik a zejména chromatografické chování těchto analytů jsou popsány oběma skupinami vzhledem k jejich významu pro správnou identifikaci těchto sloučenin. Optimalizace ukázala, že velmi pomalé rychlosti programu poskytují nejlepší separaci na nepolárních stacionárních fázích, ale doba běhu až 85 min je nepraktická. Použití úzkoprsých kapilárních kolon se stejnými fázemi zlepšilo dobu analýzy přibližně na půl hodiny díky jejich zvýšené rozlišovací schopnosti. Optimalizace kolony s polární stacionární fází DB-35MS umožnila rozlišení 10 regioizomerů MDMA s postranním řetězcem a kruhem za přibližně 4,5 min .
.