3.4.2 Cromatografía de Gases Quiral

Se ha descrito la separación de los enantiómeros de anfetamina, metanfetamina, MDA, MDMA y MDEA por GC utilizando diferentes fases estacionarias . La separación de los derivados de la l-TPC se describió en columnas de GC equivalentes a la DB-1 (metilsilicona reticulada) y a la DB-17 (fenilsilicona al 50%). Las condiciones de GC para la columna DB-17 fueron una temperatura inicial de horno a 120-210°C a 30°C/min, luego a 260°C a 6°C/min y se mantuvo durante 1 minuto. Con la columna DB-1 las condiciones fueron de 130°C a 190°C a 4°C/min, luego a 250°C a 25°C/min y se mantuvieron durante 2 min. En ambos casos, las temperaturas del puerto de inyección y de la interfaz fueron de 270°C. Los iones monitorizados fueron m/z 237 para la anfetamina y el MDA, m/z 241 para la anfetamina-D5 y el MDA-D5, m/z 251 para la metanfetamina y el MDMA, m/z 255 para la metanfetamina-D5 y el MDMA-D5, m/z 265 para el MDEA y m/z 270 para el MDEA-D5. El método podía utilizarse para separar e identificar los enantiómeros de cada uno de los analitos en concentraciones que iban de 5 a 10.000 ng/mL en todo el rango (0-100%) de cada enantiómero. Todos los picos de enantiómeros se separaron fácilmente en la columna DB-1, pero en la DB-17 no se resolvieron los enantiómeros d de MDMA y MDEA. Mientras que esto causaría un problema con muchos detectores de CG, el espectrómetro de masas fue fácilmente capaz de monitorizar selectivamente los iones únicos para cada uno de los analitos y distinguirlos unos de otros. Además, es poco probable encontrar tanto MDMA como MDEA en abuso al mismo tiempo, por lo que la probabilidad de que una muestra tenga ambos compuestos sería baja. En la descripción del análisis de los enantiómeros de MDEA, Paul et al. indicaron un problema de interferencia de iones comunes que impedía el uso de más de un solo ion para ese analito a pesar del uso de un reactivo de derivación y condiciones de GC diferentes.

Fallon et al. informaron de la disposición enantiomérica de la MDMA y los metabolitos tras la administración de MDMA (40 mg) a ocho voluntarios sanos, seguida de la recogida de muestras de orina y plasma. Tras la extracción, las drogas se derivatizaron utilizando MTPA, y se cromatografiaron en una columna DB-17 a 50°C durante 2 minutos hasta 250°C a 25°C/min y luego a 290°C a 2°C/min utilizando NPD para la detección. Las muestras de plasma se extrajeron, derivatizaron y cromatografiaron en una columna equivalente a la DB-1 (HP ultra 1) a 100°C durante 3 minutos hasta 285°C a 15°C/min y se mantuvieron durante 5 minutos y se analizaron por EM. Se utilizaron iones a m/z 119, 139, 162, 189, 260 para la anfetamina, 135, 162, 189, 260 para el MDA, 135, 162, 189, 260 para el MDMA para detectar los compuestos de interés. La cuantificación se realizó utilizando m/z 162 para las drogas y m/z 148 para el estándar interno metoxifenamina. El ensayo mostró una estrecha concordancia entre la composición enantiomérica real y la medida en tres concentraciones diferentes y cuatro proporciones distintas.

El MTPA fue utilizado por otros autores (como se indicó anteriormente) para el análisis de anfetamina y compuestos relacionados. Utilizando un DB-5MS (20 m × 0,18 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova, CA, USA) y condiciones de GC de: temperatura del puerto de inyección 140°C. La temperatura inicial del horno se ajustó a 140°C durante 0,5 minutos, luego a 215°C a 15°C/min y después a 285°C a 35°C/min y se mantuvo durante 1 minuto. La temperatura de la línea de transferencia se mantuvo a 280°C. Este método se utilizó para la separación de los enantiómeros de anfetamina y metanfetamina. Los enantiómeros de la metanfetamina se separaron en 0,07 min con un tiempo de retención de >7 min, lo que sitúa a los enantiómeros dentro del 1% uno del otro, un requisito común para una variación aceptable del tiempo de retención dentro de una ejecución analítica. Dado que ambos enantiómeros eluyen juntos, es importante evaluar cuidadosamente qué pico de enantiómero está siendo evaluado por el sistema de datos del instrumento. El procedimiento dio desviaciones estándar relativas, a tres concentraciones diferentes (500, 2000 y 4000 ng/mL) de 0,4-7,2% para la anfetamina y de 0,5 a 4,0% para la metanfetamina. El ensayo, utilizando una regresión ponderada 1/X, dio un rango lineal de 25-10.000 ng/mL. Se describió un procedimiento similar para el análisis de anfetamina, metanfetamina, MDA, MDMA y MDEA derivadas del MTPA en una columna capilar de fenilpolisiloxano al 5% (15 m × 0,25 mm i.d.; J&W Scientific Rancho Cordova) utilizando las siguientes condiciones de GC: La temperatura del horno se incrementó de 140°C durante 0,5 min a 215°C a 15°C/min durante 1,5 min hasta 285°C a 35°C/min donde se mantuvo durante 1,0 min. Las temperaturas del inyector y de la línea de transferencia fueron de 160°C y 260°C, respectivamente. El ensayo dio un rango lineal de 25-5.000 ng/mL para MDEA y de 25-10.000 ng/mL para anfetamina, metanfetamina, MDA, MDMA. La variación en la concentración de corte (500 ng/mL) estuvo dentro de ±11% para todos los analitos.

Peters et al. describieron un ensayo GC-MS de ionización química de iones negativos para la determinación de enantiómeros de anfetamina y metanfetamina en plasma o suero. Los enantiómeros se derivaron con cloruro de S-heptafluorobutirilprolyl y se separaron utilizando un GC. El método fue lineal de 5 a 250 μg/L con eficiencias de extracción de 88,9-98,6% utilizando una extracción simple en fase sólida. Las condiciones de la GC fueron las siguientes Columna de fenilmetilsiloxano al 5% (HP-5MS; 30 m×0,25 mm i.d.); temperatura del puerto de inyección, 280°C; temperatura de la columna, 100 °C incrementada a 180°C a 30°C/min, a 230°C a 5°C/min, y a 310°C a 30°C/min, línea de transferencia, 280°C; NICI, metano (2 mL/min); temperatura de la fuente, 150°C. Los iones monitorizados fueron: m/z 399, 379 y 439 para la anfetamina-d11, y m/z 388, 368 y 428 para la anfetamina; (EMV aumentado en 400 V) m/z 407, 387 y 447 para la metanfetamina-d5 y m/z 402, 382 y 442 para la metanfetamina. La mayor sensibilidad que ofrece la ionización química de iones negativos permitió utilizar un tamaño de muestra de 0,2 mL. En una publicación posterior en la que se describe el perfil metabólico de la MDMA tras la administración de la droga en un estudio controlado por el mismo autor, también se delineó una validación exhaustiva del ensayo. En otro procedimiento en el que se utilizó el NICI, Leis et al. también describieron un método para el análisis cuantitativo de los enantiómeros de anfetamina en plasma humano mediante GC/EM de ionización química de iones negativos. El método fue lineal dentro de un rango de 0,006-50 ng/mL. Tras una simple extracción líquida de 1 mL de plasma y derivatización con cloruro de (S)-heptafluorobutirilprolyl las condiciones de GC utilizadas fueron: Columna capilar de sílice fundida SGE-BPX5 (15 m×0,25 mm i.d.; ThermoQuest), inyector 280°C, la temperatura de la columna fue de 100°C durante 1 minuto, seguido de un aumento de 40°C/min a 180°C, 5°C/min de 180-195°C, 40°C/min a 310°C durante 2 min, línea de transferencia 315°C. La ionización química se realizó con metano con una corriente de emisión de 300 mA. Los iones monitorizados para este estudio farmacocinético fueron m/z 368,1 y 373,1 para la anfetamina y el estándar interno, respectivamente.

El análisis de la MDMA y los regioisómeros relacionados ha sido descrito por varios autores, ayudando a asegurar que estos compuestos estrechamente relacionados puedan ser fácilmente diferenciados . La combinación de las características espectrales de masas y particularmente el comportamiento cromatográfico de estos analitos son descritos por ambos grupos en relación a su importancia para la correcta identificación de estos compuestos. La optimización demostró que las tasas de programación muy lentas daban la mejor separación en fases estacionarias no polares, pero el tiempo de ejecución superior a 85 minutos era poco práctico. El uso de columnas capilares de diámetro estrecho con las mismas fases mejoró el tiempo de análisis a aproximadamente media hora debido a su mayor poder de resolución. La optimización de una DB-35MS, una columna de fase estacionaria polar, permitió la resolución de 10 regioisómeros de cadena lateral y de anillo de MDMA en aproximadamente 4,5 min.